• <dl id="r2g8h"><menu id="r2g8h"></menu></dl>
    <sup id="r2g8h"><menu id="r2g8h"></menu></sup>
  • <div id="r2g8h"></div>
    <div id="r2g8h"><s id="r2g8h"></s></div>

    上海博迅官網

    服務熱線:17511683092
    021-58201756

    他們都在找: 博迅GZX-9070MBE電熱鼓風干燥 博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅 博迅YXQ-LB-50SII立式壓力蒸
    當前位置主頁 > 新聞動態 > 行業動態 >

    米粉中阪崎克羅諾桿菌的耐受性研究

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-18 13:29【

    阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)是一 種革蘭氏陰性致病菌,常污染乳及乳制品,可引起 嚴重的新生兒腦膜炎、 壞死性小腸結腸炎和敗血 癥,死亡率高達 50%以上。 即使治愈,也可能使 神經系統產生后遺癥。 近幾年,隨著國內外一系 列與阪崎克羅諾桿菌相關的污染事件的爆發,該 菌受到研究者的廣泛關注。 目前,對阪崎克羅諾 桿菌確切的污染來源尚不清楚, 許多病例表明嬰 幼兒配方乳粉是該菌的主要感染載體。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株

    阪崎克羅諾桿菌標準菌株 ATCC BAA-894 由中國食品藥品檢定研究院提供,分離 于嬰幼兒配方乳粉和米粉中不同基因型的阪崎克 羅諾桿菌 11-19 (1)、12-4 (1)、12-8 (1)、12-13 (2)、13-8(2)、13-2(1)、14-20(1)、14-15(2)、14-4 (1)、15-9(2)、18-16(1)、18-8(1)、18-24(1)、18- 12(2)和 18-14(1)由西北農林科技大學食品科學 與工程學院微生物研究室提供。 供試代表性菌株 選擇標準: 分離于不同時間采集的不同品牌的嬰 幼兒乳粉或米粉, 具有不同耐藥表型和基于脈沖 場 凝 膠 電 泳 (Pulsed field gel electrophoresis, PFGE)的基因型,攜帶不同毒力基因。 產乳酸菌素 乳酸菌由西北農林科技大學食品科學與工程學院 呂欣博士惠贈。

    1.1.2 材料與試劑

    LB 瓊脂培養基、LB 肉 湯 培 養基、MH 瓊脂培養基(MHA)和腦心浸液培養基 (BHI),購自北京陸橋技術有限責任公司;媽咪愛, 購自北京韓美藥品有限公司; 制作菌懸液用嬰幼 兒配方乳粉,購于陜西楊陵好又多超市,為適于較 大嬰兒及幼兒食用的 2 段配方牛乳粉。

    1.1.3 主要儀器

    高壓滅菌鍋 (LAC-5080S),上海博訊;超凈工作臺(SW-CJ-1CU),蘇州泰安;微 量移液槍(Effendorf),德國;百分之一天平(XS204), 梅特勒;恒溫培養振蕩器(ZHWY-211B),上海智 誠。

    1.2 方法

    1.2.1 菌株活化和擴大培養

    用接種環分別蘸取 少量保存于-80 ℃ LB 肉湯/甘油(50%/50% V/V) 中的阪崎克羅諾標準菌株和分離株, 劃線接種到 LB 瓊脂培養基表面,37 ℃培養 18~24 h。 從 LB 培 養基上挑取一個單菌落, 接種到 20 mL BHI 肉湯 中,37 ℃、100 r/min 下搖床培養 10 h。

    1.2.2 菌液初始濃度測定和存活率計算

    取 1 mL 阪崎克羅諾桿菌 BHI 肉湯培養物,用生理鹽水 依 次 進 行 10 倍 稀 釋, 分 別 得 到 其 101 ,102 ,103 , 104 ,105 和 106 倍稀釋液。 分別取各稀釋液 50 μL 接種于 LB 平板上, 涂布均勻后 37 ℃下倒置培養 18 h, 計數。 同時接種 50 μL 無菌生理鹽水于 LB 平板表面作為陰性對照。 每個稀釋度(包括對照) 共做 3 個重復。 選擇菌落分布均勻且皿內菌落數 在 30~300 CFU 的稀釋度的菌落數計算菌液的起 始濃度。

    1.2.3 阪崎克羅諾桿菌對溫度的耐受性測定

    結合日常生活中乳粉沖調時使用的水溫, 分別選取 50,60 和 70 ℃ 3 個溫度點進行研究。 取 1.2.1 節 中的 BHI 肉湯培養物 1 mL 加入到滅菌的裝有 10 mL 沖調乳粉(用礦泉水按照乳粉生產商的推薦比 例沖調,下同)的 50 mL 離心管中,振蕩混勻,將離 心管分別置于 50,60 和 70 ℃的水浴中保溫處理 20 min,保溫過程不斷進行振蕩使菌體受熱均勻。 處理結束后,按照 1.2.2 節所述方法,立即取樣測定阪崎克羅諾桿菌的濃度并計算存活率, 采用存 活率衡量其對溫度的耐受性。

    1.2.4 阪崎克羅諾桿菌對 pH 的耐受性測定

    將 沖調好的乳粉高溫滅菌后, 使用無菌 HCl 和/或 NaOH 調整其 pH 為 4.0,6.0 和 8.0, 確定每個離 心管中調整 pH 值后的乳粉體積為 20 mL 后,分 別向其中 加 入 1 mL 1.2.1 節 中 的 BHI 肉 湯 培 養 物,振蕩勻后室溫下靜置 20 min。 處理結束后,按 照 1.2.2 節所述方法,立即取樣測定阪崎克羅諾桿 菌的濃度并計算存活率,采用存活率衡量其對 pH 的耐受性。

    2 結果與分析

    阪崎克羅諾桿菌經 50,60 和 70 ℃處理后的 存活率見表 1。 50 ℃處理后,除 12-8(1)和 14-15 (2)死亡較多外,其它菌株基本沒有死亡,大部分 菌株反而呈生長態勢。 當溫度上升到 60 ℃時,所 有菌株都呈現出死亡的趨勢。70 ℃時,所有菌株的 存活率都低于 0.11%。 對 3 種溫度處理后阪崎克 羅諾桿菌濃度的對數值方差分析和多重比較結果表明:50,60 與供試菌株在 pH 4.0,6.0 和 8.0 條件下處理后 的存活率。 3 種 pH 條件處理后,大部分菌 株出現不同程度死亡。 13-2(1)的死亡率均相對較 高,說明該菌對 pH 比較敏感。 18-8(1)、18-16(1) 和 18-12(2)經 pH 處理后還出現增長態勢,表明對 pH 的耐受性非常強。阪崎克羅諾桿菌經 3 種 pH 處理后存活率方 差分析和多重比較結果表明:pH 4.0 條件處理與 pH 6.0 和 pH 8.0 條件處理后菌液濃 度的對數值在 1%水平上存在極顯著差異。 pH 6.0 與 pH 8.0 條件處理后菌株存活率無顯著性差異。菌株 12-4(1)對乳酸菌最敏 感,而 14-4(1)和 15-9(2)的耐受性較強,表明產 乳酸菌素的乳酸菌對阪崎克羅諾桿菌生長具有一 定的抑制, 多重比較結果表明不同菌株對乳酸菌 的敏感性具有極顯著的差異。

    3 討論

    阪崎克羅諾桿菌是一種常見的食源性條件致病菌,在嬰幼兒乳粉、米粉、奶酪、面包及豆腐等多 種食品中均被檢出。 自 Muytjens 等于 1983 年 從沖調乳粉的器具上分離到阪崎克羅諾桿菌,繼 而將其與嬰幼兒乳粉聯系起來后,世界多地,如: 美國、丹麥、冰島和新西蘭等,均出現了由阪崎克 羅諾桿菌引起的疾病暴發。 2011 年,在美國俄克 拉馬州和密蘇里州相繼發生了嬰兒感染阪崎克羅 諾桿菌致死的事件,之后,美國的沃爾瑪超市及一 些零售商開始大規模召回嬰幼兒乳粉。 這些事 件的爆發表明研究與乳粉密切相關的阪崎克羅諾 桿菌具有十分重要的意義。

    比比先锋资源上口爱冰淇淋