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    區感染性腹瀉標本常見病原菌譜-博迅分析

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-17 10:01【

    感染性腹瀉是一組由細菌、病毒和原蟲等多種腸 道病原體感染引起的,以腹瀉癥狀為主的腸道傳染病, 廣泛流行于世界各地,由于該病發病率高、流行極其廣 泛,已成為全球尤其是發展中國家的重要公共衛生問題。細菌性腹瀉在感染性腹瀉中所占比例較高,其 常見病原菌有沙門菌、腸致瀉性大腸埃希菌( diarrheagenic Escherichia coli,DEC) 、弧菌、志賀菌、氣單胞菌、 空腸彎曲菌、小腸結腸耶爾森菌、金黃色葡萄球菌、艱 難梭菌、蠟樣芽胞桿菌、克羅諾桿菌、單增李斯特菌等。腹瀉病人糞便標本中病原菌的分布各地不同, 主要取決于當地的致病菌譜、主要流行菌株和當地人 群的免疫狀況等,北京地區沙門菌、DEC 和副溶血性 弧菌檢出率較高。

    1 材料與方法

    1. 1 標本來源

    本轄區哨點醫院腸道門診 2017 年 5 月-2018 年 4 月感染性腹瀉患者的 380 份( 1-3、11- 12 月各 20 份,其他月份各 40 份) 糞便標本,患者的選 入標準為: 每日排便≥3 次,大便性狀改變( 呈稀便、水樣便、黏膿便或膿血便等) ,且均未服用抗生素。用無 菌棉簽采集標本后,保存于 Cary-Blair 運送培養基,按 生物安全要求于采樣當天送至監測實驗室。

    1. 2 試劑與儀器

    XLD 培養基、血平板、CCI 培養基 和 EC 肉湯( 英國 OXOID) ; 大腸桿菌、沙門菌和弧菌顯 色培養基( 法國科馬嘉) ; RS 和 CN 培養基( 北京陸 橋) ; 空腸彎曲菌雙孔濾膜法培養檢測試劑盒( 青島中 創) ; SBG 增菌液和 3% NaCl 堿性蛋白胨水( 友康恒業 生物科技) ; Genbag 微需氧產氣袋和 VITEK GN/GP 鑒定卡( 法國生物梅里埃) ; 志賀菌診斷血清和副溶血 弧菌診斷血清( 日本 Denka Seiken) 、沙門菌診斷血清 ( 丹麥 SSI) 、生物安全柜(上海博迅) 、恒溫培養箱( 日 本 SANYO) 、全自動細菌鑒定儀 VITEK 2 和濁度儀( 法 國生物梅里埃) ,Premix Ex TaqTM( Probe qPCR) 購自 大連寶生物公司; 7 對特異性基因( eae、stx1、stx2、lt、 st、ipaH、aggr) 引物及探針由北京市疾病預防控制中 心提供。

    1. 3 病原菌檢測方法

    沙門菌、DEC、副溶血性弧菌 和志賀菌的分離、生化鑒定及血清學分型按照《感染 性腹瀉診斷標準 WS271-2007》和《細菌性和阿米巴性 痢疾診斷標準 WS287-2008》; 氣單胞菌用 RS 平板進 行選擇性分離( 37 ℃,18 ~ 24 h) ,可疑菌落為黃色; 銅 綠假單胞菌用 CN 平板進行選擇性分離( 37 ℃,18 ~ 24 h) ,可疑菌落為藍/綠色菌落、產熒光的非藍/綠色菌落和紅褐色菌落; 金黃色葡萄球菌用 7. 5%氯化鈉 肉湯進行增菌( 37 ℃,18~24 h) ,之后用血平板進行選 擇性分離( 37 ℃,18~24 h) ,可疑菌落較大、圓形、光滑 凸起、濕潤、金黃色( 有時為白色) 、周圍可見完全透明 溶血圈; 克羅諾桿菌用 MLST -Vm 肉湯( 44 ℃,18 ~ 24 h) 進 行 增 菌,之 后 用 CCI 平板進行選擇性分離 ( 37 ℃,18 ~ 24 h) ,可疑菌落為藍綠色; 空腸彎曲菌的 分離鑒定詳見空腸彎曲菌雙孔濾膜法培養檢測試劑盒 說明書。用全自動細菌鑒定儀 VITEK 2 對所有可疑菌 進行生化鑒定,診斷血清進行血清學分群,PCR 進行 DEC 特異性基因的分析,其中腸致病性大腸埃希菌 ( enteropathogenic Escherichia coli,EPEC) : eae 陽性; 腸 出血性大腸埃希菌( enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC) : eae、stx1 和 stx2 陽性,或 eae 和 stx1 陽性,或 eae 和 stx2 陽性; 腸產毒性大腸埃希菌( enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC) : lt 和 st 陽性,或 lt 陽性,或 st 陽性; 腸侵襲性大腸埃希菌( enteroinvasive Escherichia coli,EIEC) : ipaH 陽性; 腸集聚性大腸埃希菌( enteroaggregative Escherichia coli,EAEC) : aggR 陽性。

    1. 4 數據分析

    采用 SPSS 20. 0 軟件進行統計學分 析,計數資料使用 χ2 檢驗,P< 0. 05 為差異有統計學 意義。

    2 結 果

    在 380 份感染性腹瀉患者糞 便標本中,檢出病原菌 189 株,檢出率為 49. 74%,其中 29 份糞便標本中檢出≥2 種病原菌。除常規監測工作 中主要監測的 DEC( 構成比 13. 76%) 、副溶血性弧菌 ( 構成比 10. 58%) 、沙門菌( 構成比 10. 05%) 和志賀菌 ( 構成比 0. 53%) 外,還檢出金黃色葡萄球菌、氣單胞 菌、克羅諾桿菌、空腸彎曲菌、河弧菌、非 O1 /O139 群 霍亂弧菌等 6 種腹瀉相關病原菌和肺炎克雷伯菌、產 酸克雷伯菌、銅綠假單胞菌等 3 種機會致病菌。在 189 株病原菌中檢出率最高的是肺炎克雷伯菌( 構成 比 19. 05%) ,其次為金黃色葡萄球菌 ( 構 成 比 17. 99%) 。同一菌屬中的進一步分群發現,沙門菌中 主要為腸炎沙門菌( 占 36. 84%,7 /19) ,DEC 中 EPEC ( 占 42. 31%,11 /26) 和 ETEC( 占 38. 46%,10 /26) 檢出 較多,副溶血性弧菌的主要血清型為 O3: K6 ( 占 69. 57%,16 /23 ) ,氣單胞菌以溫和氣單胞菌 ( 占 76. 47%,13 /17) 為主,克雷伯菌中主要為肺炎克雷伯 菌( 占 94. 74%,36 /38) 。

    3 討 論

    細菌性腹瀉是全球性的公共衛生問題,引起細菌 性腹瀉的病原菌種類多,且各地腹瀉病人糞便標本病 原菌檢出情況不一。本研究結果顯示,北京市昌 平區腹瀉患者糞便標本中機會致病菌肺炎克雷伯菌檢 出率最高,其次為金黃色葡萄球菌,之后才是常規監測 ( 沙門菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、志賀菌、DEC、彎曲 菌和小腸結腸耶爾森菌) 中的 DEC、副溶血性弧菌和沙 門菌,其他 5 種病原菌( 氣單胞菌、空腸彎曲菌、志賀 菌、克羅諾桿菌、銅綠假單胞菌) 也有檢出。

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