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    淺談小葉三點金提取物的抗炎作用!

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-10 11:05【

    小葉三點金為豆科山螞蝗屬植物小葉三點金草 [Dcsmodium microphyllum(Thunb.)DC.],別名“斑鳩窩” “爬地香”“哮靈草”“小葉山綠豆”“辮子草”“碎米柴”等, 以其根及全草入藥 。小葉三點金在民間常用于治療 尿路感染、糖尿病、泌尿系結石、慢性胃炎、慢性氣管炎 等病癥,具有清熱解毒、健脾利濕、消炎止血、止咳平喘、活血化瘀等功效,也被廣泛用于治療毒蛇咬傷、癰瘡潰 爛、漆瘡、痔瘡等 。

    1 材料

    1.1 儀器

    GL124-1SCN 型電子天平[賽多利斯科學儀器(北 京)有限公司];UV-1780 型紫外-可見分光光度計[島津 儀器(蘇州)有限公司];TGL-16GB型離心機(上海安亭 科學儀器廠);全波長型酶標儀[帝肯(上海)貿易有限公 司];BXM-30R型立式壓力蒸汽滅菌器(上海迅博實業有限公司醫療設備廠);RE-1002型旋轉蒸發儀(常州市國 旺儀器制造有限公司)。

    1.2 藥品與試劑

    醋酸地塞米松片(浙江仙琚制藥股份有限公司,批 號:180119,規格:0.70 mg);頭孢克肟分散片(浙江莎普 愛思藥業股份有限公司,批號:180162E,規格:50 mg); 二甲苯、冰醋酸、伊文思藍(國藥集團化學試劑有限公 司,批號分別為F20180618、T20180912、20180725);角叉 菜膠(上海源葉生物科技有限公司,批號:YY18704);水 合氯醛(成都市科龍化工試劑廠,批號:2018020102);超 氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)酶 聯 免 疫 吸 附(ELISA)檢 測 試 劑 盒(批 號 分 別 為 20180308、20180305、20180316)均購自南京建成生物工 程研究所;其余試劑均為分析純或由實驗室自行配制; 生理鹽水為0.9%氯化鈉注射液,水為純化水。

    1.3 藥材

    小葉三點金藥材采自廣西南寧市上林縣,經廣西中 醫藥大學藥學院陳勇教授鑒定為豆科山螞蝗屬植物小 葉 三 點 金 草 [Dcsmodium microphyllum(Thunb.)DC.] 全草。 1.4 動物 清潔級昆明種小鼠,雄性,體質量18~22 g,由廣西 醫科大學實驗動物中心提供,動物生產許可證號:SCXK 桂2014-0001。小鼠在實驗前于清潔級動物房適應性喂 養3 d,環境溫度為(25±1)℃、濕度約為65%、人造光周期為12 h明暗交替。小鼠自由攝食飲水,飼料為標準嚙 齒類動物飼料,飲水為純化水。動物飼料、墊料均由廣 西醫科大學實驗動物中心提供。

    2 方法

    參考方法進行小葉三點金提取物的抗炎活 性作用考察。

    2.1 小葉三點金提取物的制備

    取小葉三點金藥材 5 kg,打成粗粉,以 70%乙醇在 約82 ℃條件下回流提取3次,每次溶劑倍量分別為12、 8、6倍(L/kg),提取時間分別為2、1.5、1 h;濾過,合并濾 液,用旋轉蒸發儀在水浴條件下減壓濃縮,然后于55 ℃ 水浴中揮干溶劑,稱定質量,得率為12.85%。

    2.2 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗

    取小鼠60只,按體質量隨機分為空白組、陽性對照 組(地塞米松,0.005 g/kg;劑量根據人給藥劑量換算并結 合預實驗結果制定)和小葉三點金提取物高、中、低劑量 組(50、30、15 g/kg,以所含原生藥量計算,下同;劑量根 據急性毒性實驗與預實驗結果制定),每組12只。各給藥 組小鼠分別灌胃給藥(分別將地塞米松片和小葉三點金 提取物以水配制成相應藥液),給藥體積均為20 mL/kg, qd,連續給藥7 d;空白組小鼠同法灌胃等體積水。末次 給藥1 h后,于小鼠右耳正反兩面各涂抹二甲苯10 μL致 炎(劑量根據預實驗結果設定);15 min后脫頸椎處死小 鼠,沿耳根部剪下兩耳,用6 mm打孔器在兩耳相同部位 打下等面積圓耳片,稱定質量,計算耳腫脹度及腫脹抑 制率。耳腫脹度(mg)=右耳片質量-左耳片質量;耳腫 脹抑制率(%)=([ 空白組平均耳腫脹度-實驗組平均 耳腫脹度)/空白組平均耳腫脹度]×100%。

    2.3 冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加實驗

    取小鼠60只,按“2.2”項下方法分組、給藥。末次給 藥 1 h 后,對各組小鼠尾靜脈注射 0.3%伊文思藍溶液 10 mL/kg、腹腔注射0.6%冰醋酸溶液10 mL/kg致炎(劑 量根據預實驗結果設定);15 min后脫頸椎處死小鼠,腹 腔注射生理鹽水6 mL沖洗腹腔,輕揉其腹部1 min后, 剪開腹腔收集腹腔液;腹腔液以 3 000 r/min 離心 12 min,取上清液,采用紫外-可見分光光度計于590 nm波 長處測定光密度(OD)。以OD值表示毛細血管通透性, OD值越高則毛細血管通透性越大。

    2.4 角叉菜膠致小鼠足腫脹實驗

    取小鼠60只,按“2.2”項下方法分組、給藥。末次給 藥1 h后,在各組小鼠右后足趾部皮下注射1%角叉菜膠 溶液0.02 mL致炎(劑量根據文獻[11]設定);15 min后脫 頸椎處死小鼠,剪取其后雙足趾相同部位,稱定質量,計 算小鼠足腫脹度及腫脹抑制率。足腫脹度(mg)=小鼠 右后足趾質量-小鼠左后足趾質量;足腫脹抑制率(%)=([ 空白組平均足腫脹度-實驗組平均足腫脹度)/ 空白組平均足腫脹度]×100%。

    3 結果

    與空白組比較,陽性對照組和小葉三點金提取物 高、中劑量組小鼠耳腫脹度均顯著降低,耳腫脹抑制率 均顯著升高,差異均有統計學意義(P<0.05 或 P< 0.01);與陽性對照組比較,小葉三點金提取物低劑量組 小鼠耳腫脹度顯著增高,耳腫脹抑制率顯著降低,差異 均有統計學意義(P<0.05),而小葉三點金提取物高、中 劑量組小鼠耳腫脹度及腫脹抑制率差異均無統計學意 義(P>0.05)。與空白組比較,陽性對照組和小葉三點金提取物各 劑量組小鼠腹腔毛細血管通透性均顯著增加,差異均有 統計學意義(P<0.05 或 P<0.01);與陽性對照組比較, 小葉三點金提取物各劑量組小鼠腹腔毛細血管通透性差異無統計學意義(P>0.05)。與空白組比較,陽性對照組和小葉三點 金提取物高、中劑量組腎上腺摘除小鼠足腫脹度均顯著 降低,足腫脹抑制率顯著升高,差異均有統計學意義 (P<0.05 或 P<0.01);與陽性對照組比較,小葉三點金 提取物低劑量組腎上腺摘除小鼠足腫脹度顯著增高,足 腫脹抑制率顯著降低,差異均有統計學意義(P<0.05), 而小葉三點金提取物高、中劑量組腎上腺摘除小鼠足腫 脹度及腫脹抑制率差異均無統計學意義(P>0.05),

    4 討論

    中藥以其種類繁多、成分復雜多樣、藥理作用廣泛、 毒副作用少等特點成為抗炎藥物研究的首選對象。炎 癥通常會改變機體的正常生理指標,誘發多種急、慢性 炎癥疾病,并使含血管系統的生物機體產生復制的防 御反應。目前,臨床治療抗炎藥物是僅次于抗感染 藥物的第二大類藥物,除腎上腺皮質激素類與非甾體類 抗炎藥物以外,還涉及部分中藥,應用較為廣泛。許 多清熱解毒及抗凝血化瘀中藥具有抗炎、改善血液循環 功能,其在防治急慢性炎癥、腹腔感染性疾病等方面具 有明顯療效。實驗研究證實,中藥的抗炎作用機制 具多途徑作用的特點,主要包括影響下丘腦-垂體-腎上 腺皮質軸(HPAA)系統功能、抑制花生四烯酸代謝、干擾 炎癥細胞、抗血栓生成、清除氧自由基等方面,與現代藥 理學炎癥機制研究相對應,其研究和開發價值越來越受 到學者的重視。

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