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    博迅淺談薰衣草提取物的作用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-28 10:20【

    阿爾茨海默病俗 稱早老性癡呆癥,是發生于老年和老年前期以進 行性神經退化為特征的中樞神經系統變行性疾 病,是大腦退行性病變,其主要臨床表現為認知功 能減退并伴有行為障礙和情緒異常等,嚴重者甚 至失去生活自理能力。隨著 我 國 人 口 老 齡 化 進程的加快,AD發病率呈不斷上升的趨勢,嚴重 威脅老年人的生命健康。AD 的發病機制十分復 雜,目前多方面研究表明,AD 患者大腦內神經遞 質-乙酰膽堿的缺失是導致 AD 疾病的關鍵原因,AD的病理與患者神經間隙中乙酰膽堿酯酶活性過高具有重要關系。



    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試試劑


    乙酰膽堿酯酶(AChE,Sigma 公司),碘 化 乙 酰 硫 代 膽 堿 (ATCI,Aladdin 公 司),5,5’-二 硫 代 雙 (2-硝 基 苯 甲 酸)(DTNB, Aladdin公司),石杉 堿 甲(huperzineA,Aladdin 公司),二甲基亞砜(DMSO,GR,天津市北聯精細 化學品開發有限公司),磷酸二氫鈉(AR,天津市 致遠化學試劑有限公司),磷酸氫二鈉(AR,天津 市致遠化學試劑有限公司),沒食子酸(AR,成都 市新都區木蘭鎮工業開發區),無水碳酸鈉(AR, 上海試四赫維化工有限公司),福林酚試劑(AR, 天津市光復精細化工研究所);其余化學試劑均為 國產分析純,實驗用水為去離子水;薰衣草(由伊 犁紫蘇麗人有限責任公司提供,經新疆分析測試 研究院阿依古麗副研究員鑒定確認)。



    1.1.2 儀器設備

    酶標儀I3X(MD 公司),制備 液相色譜儀(日本島津公司),碎樣機(北京開創同和科技發展有限公司),電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司),電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實業有限公司),冷卻水循環機(萊博科泰公司),實驗 室冷凍干 燥 機(德 國 CHRIST),分析 天 平(梅 特 勒-托利多),聯用型平行蒸發儀(BUCHI),紫外分光光度計 UV-2700(日本島津公司),超純水系 統(美國密理特公司),酶標板(Costar公司)。



    1.2 方法

    1.2.1 薰衣草提取物的制備


    取薰衣草干花適 量,用碎樣機粉碎,過篩,保存備用。稱取 粉 碎 后 樣品于錐形瓶,加入70%的乙醇(料液比1∶10), 80℃回流提取1h,過濾,重復提取2次,合并2次 濾液,減壓濃縮至無醇味,過聚酰胺柱,減壓濃縮 后凍干,稱重;將凍干的過完聚酰胺柱的組分溶解 后過 HP20樹脂 柱,收 集 洗 脫 液,減 壓 濃 縮 后 凍 干,稱重,取該提取物加甲醇超聲溶解,進制備液 相,按時間收集,得30個組分,減壓濃縮后凍干, 稱重;配置1mg·mL-1溶液,放于4℃冰箱保存備 用,作為進行乙酰膽堿酯酶活性測定的樣品溶液。



    1.2.2 薰衣草提取物多酚含量的測定

    標準曲 線制備:各取不同濃度的沒食子酸標準液0.5mL 于10mL比色管中,加入5mL10%的福林酚試 劑,加入3mL10%碳酸鈉溶液,充 分 混 勻,室 溫 避光反應90min;在765nm 處測定吸光度值,以 吸光度值(A)為縱坐標,以濃度(C)為橫坐標,繪 制標準曲線。 樣品 測 定:取 待 測 樣 品 溶 液 0.5 mL,加 入 5mL10%的福林酚試劑,加入3mL10%碳酸鈉 溶液,混勻,室溫 避 光 反 應90min;在765nm 處 測定吸光度值。



    1.2.3 薰衣草提取物對乙酰膽堿酯酶的抑制活

    性研究 參 考 文 獻方 法,在 96 孔 板 中 加 人160μL0.1mol·L-1 PB 緩沖 液(pH7.4),10μL 1U·mL-1 AChE和10μL待測樣品溶液(1mg·mL-1), 混勻,4 ℃放置20min。加入10μL10mmol·L-1 DTNB和10μL10 mmol·L-1 ATCI,37 ℃反應 20min,用酶標儀測定405nm 處吸光度值。同時 設立背景對照組和空白對照組。按下式計算酶活性抑制率。



    2 結果與分析

    對30個薰衣草提取物樣品測定多酚含量,結 果如表1。其中13、14、15、16號樣品多酚含量較 高,分別為63.20,51.72,46.79,81.82μg·mL-1; 5~18號樣品多酚含量均大于20μg·mL-1;其余 樣品多酚含量較低,均小于12μg·mL-1。將30個薰衣草樣品的多酚含量及酶 活 性 數 值進行比較,做相關性分析,可知多酚含 量的高低與乙酰膽堿酯酶抑制活性高低可能不存 在相關性。如圖中16號樣品多酚含量最高,但其 乙酰膽堿酯酶抑制活性不是最高或最低,此 外, 6號樣品乙酰 膽 堿 酯 酶 抑 制 活 性 最 低,但 其 多 酚 含量為28.13μg·mL-1。由此 可 見,多 酚 不 是 薰 衣草提取物中抑制乙酰膽堿酯酶的主要活性物質。



    3 結論與討論

    AD在我國 患 病 率 在65歲以 上 的 老 年 人 口 中約 占 5%,75 歲 以上的老年人口中上升為20%,85歲以上超過45%,到2040年若仍找不到 有效的防治辦法,我國 AD病人將會達到900萬, 尋找安全、高效、專一的治療 AD的天然藥物刻不容緩。目前市面上銷售的用于治療 AD的藥物包 括利斯的明、多奈哌齊等,對身體具有不同程度的 傷害。因此尋找高效、副作用小的天然乙酰膽 堿酯酶抑制活性產物對 AD 患者具有 重 要 意 義。 石杉堿甲是從中草藥蛇足石杉中分離到的一種強 乙酰膽堿酯酶抑制劑,本研究以石杉堿甲為陽性 對照對薰衣草提取物進行乙酰膽堿酯酶抑制活性 研究,發現部分薰衣草提取物對乙酰膽堿酯酶的 抑制作 用 十 分 顯 著,抑 制 率 高 達50%~80%,而 對于多酚含量的比較之后,可以發現,多酚不是薰 衣草提取物中抑制乙酰膽堿酯酶的主要活性物 質,二者之間不存在相關性,這為 AD藥物的研發 提供了理論基礎和試驗依據。



     


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