• <dl id="r2g8h"><menu id="r2g8h"></menu></dl>
    <sup id="r2g8h"><menu id="r2g8h"></menu></sup>
  • <div id="r2g8h"></div>
    <div id="r2g8h"><s id="r2g8h"></s></div>

    上海博迅官網

    服務熱線:17511683092
    021-58201756

    他們都在找: 博迅GZX-9070MBE電熱鼓風干燥 博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅 博迅YXQ-LB-50SII立式壓力蒸
    當前位置主頁 > 新聞動態 > 行業動態 >

    急性白血病中的診斷價值分析(SSW-420-2S使用)

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-12-12 09:16【

    急性白血病(acute leukemia,AL)是常見的 血液病,在血液系統惡性疾病中占首位,其準確 分型對患者的治療和預后具有重大的指導意義。 基于形態學(包括細胞化學染色)的 FAB 分型法 是傳統的分型方法。隨著世界衛生組織(WHO) 對白血病分型的提出、流式細胞術的發展,免疫 分型在臨床的應用越發廣泛。目前,MICM 分型已 得到國內外學者的高度認可,但仍有很多基層醫 院、甚至很大一部分三級醫院受試劑、儀器等的 限制無法普及,尤其細胞遺傳學及分子生物學分 型,在很多醫院應用受阻。


    材料和方法 


    病例一般資料 2016 年 4 月 - 2018 年 6 月在本院確診的初診急性 白血病患者 119 例。所有患者均符合白血病的診斷標準,其中 AML-M0(M0)1 例,AML-M1(M1) 4 例,AML-M2(M2)37 例,AML-M3(M3)25 例, AML-M4(M4)5 例,AML-M5(M5)10 例,AML 未分型 3 例,ALL 33 例,MAL 1 例。其中男性 65 例, 女性 54 例,中位年齡 46(3-89)歲。


    儀器與試劑


     瑞氏 - 姬姆薩染色液試劑盒購自珠海貝索生物技 術有限公司,過氧化物酶(POX)染色試劑、過碘酸雪夫反應(PAS)染色試劑、醋酸萘酚酯酶(NAE) 染色試劑購自廣東西隴化工股份有限公司,由本 實驗室配制。FACSCanto II 型流式細胞儀、所有 破膜劑、溶血素及單克隆抗體,包括:HLA-DR、 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、 CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、 CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、 CD41a、CD42b、CD56、CD58、CD61、CD64、 CD71、CD79a、CD105、CD117、CD123、GlyA、 CD45,均購自美國 Becton Dickinson 公司。細胞染 色體培養液、秋水仙胺購自天津瑞愛金生物科技 有限公司,ABI 7500 型 PCR 儀購自美國 Life 公司, Vilber 凝膠分析系統購自法國 Lourmat 公司,DY600 型中壓電泳儀購自廣東省汕頭市金砂廣播儀器 廠,博迅SSW-420-2S 型電熱恒溫水浴箱購自上海博迅 實業有限公司醫療設備廠,淋巴細胞分離液購自 華美生物工程公司,白血病相關融合基因檢測試 劑盒購自上海源奇生物醫藥科技有限公司。 


    細胞形態學檢查 


    選取骨髓小粒多、涂片好的骨髓涂片進行瑞氏 - 姬姆薩染色,油鏡下在細胞單個散在、分布均勻 的區域分類計數 200 個有核細胞,同時進行細胞 化學染色,包括過氧化物酶(POX)染色、過碘酸 - 雪夫反應(PAS)染色、醋酸萘酚酯酶 + 氟化鈉抑 制實驗(NAE+NaF),計數陽性率并觀察酶型。 操作主要參考《全國臨床檢驗操作規程第三版》, 按 FAB 標準分型。 


    免疫學分型


     采集患者肝素抗凝骨髓液 1-2 ml,24 h 內用流 式細胞儀進行測定,按 CD45/SSC 設門分出骨髓 細胞中的幼稚細胞群和成熟細胞群;根據需要 選擇相應系列的免疫熒光標記的單克隆抗體, 進行免疫表型檢測并分析其抗原表達情況,結 果判定以膜抗原> 20%,CD34 和胞質內抗原> 10% 為陽性,根據歐洲白血病免疫分類協作組(European Collaborative Group on Immunotaxonomy of Loubernix,EGIL)積分標準確定類型。 


    染色體核型分析


     采集患者肝素抗凝骨髓液 2-5 ml,按 2×106 /ml 細 胞密度接種于細胞染色體培養液中,過夜培養, 終止培養前 1 h 加入終濃度為 0.05 ul/ml 的秋水仙 胺,再離心收獲細胞,用甲醇和冰醋酸按 3∶1 配 置成的固定液固定 3 次,滴片,R 顯帶法進行核 型分析,每份標本盡可能分析至少 20 個中期相細 胞。核型描述參照《人類細胞遺傳學國際命名體 制(ISCN2013)》。 


    分子生物學檢測


     采集患者 2-3 ml 抗凝骨髓液,加入等體積生理鹽 水稀釋,用淋巴細胞分離液分離單個核細胞,再 裂解單個核細胞,提取總 RNA,測定 RNA 濃度。 取 20 μl 反應體系,以試劑盒提供的逆轉錄酶、 特異引物和模板,在 37℃逆轉錄反應 1 h 得到 cDNA,以 cDNA 為模板進行多重巢式 PCR 反應, 最后取反應產物在 1.5% 瓊脂糖凝膠中電泳,觀察 分析結果。 統計學分析 采用 SPSS 17.0 軟件分析,計數資料比較采用卡方 檢驗,P < 0.05 為差異有統計學意義。


    結  果


    119 例急性白血病中 M1 3 例,M2 27 例,M3 25 例, M4 5 例,M5 13 例,AML 未分型 10 例,ALL 32 例, AL 4 例。原始細胞及原始細胞等同細胞的形態和 細胞化學染色具有如下特征:①原始粒細胞:胞 體多數圓形或類圓形,胞漿量少、天藍色、繞于 核周,胞漿無顆粒或見細小嗜天青顆粒,胞核圓 形或類圓形,居中或稍偏位,染色質細顆粒網狀、 均勻平坦,有淡藍色核仁 1- 數個。POX 染色陽性 率≥ 3%,呈弱陽性、陽性或較強陽性,陽性反應 物顆粒較粗大、聚集、濃縮。PAS 染色多 為弱陽性,陽性反應物表現為細顆粒彌散狀。非 特異性酯酶(NAE)染色呈陰性或弱陽性,陽性 反應物表現為彌散狀,不被 NaF 抑制。② M2b 細胞: 有二種類型,一種分化程度差,原始細胞胞核常 見凹陷,染色質細致,核仁常見,核凹陷處常見“黃 沙土樣”改變,或稱“朝陽紅”, 易見 1 或 2 根細長 Auer 小體。


    討  論


     急性白血病形態學分型是結合細胞形態學和細胞 化學染色特征進行分型,可對急性白血病進行亞 型診斷,迄今為止,仍是白血病診斷的基礎。 盧興國教授也提出,所有白血病診斷的起點是 基于外周血細胞形態學的檢驗,經檢查和評估得 到的信息具有重要的臨床意義和價值。本研究發 現,某些類型的急性白血病有其典型的形態學特 征,如M3、M4EO,單純靠形態學基本可以明確診斷, 這兩種類型白血病也可以單純靠細胞遺傳學或分 子生物學直接診斷,但后者檢測時間較長,且受 儀器、試劑等的限制無法廣泛普及;本次研究還 發現,單純形態學分型的診斷符合率達 76.5%,接 近單純免疫學分型的診斷符合率(79.8%),兩者 間的差異無統計學意義。






    免責聲明:文章僅供學習和交流,如涉及作品版權問題需要我方刪除,請聯系我們,我們會在第一時間進行處理。


    比比先锋资源上口爱冰淇淋