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    三斑海馬及其混偽品的DNA條形碼分子鑒定研究

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-12-10 18:03【

    《中國藥典》2015 年版記錄并收載 5 個品種的 海馬藥材:三斑海馬 Hippocampus trimaculatus Leach、線紋海馬 Hippocampus kelloggi Jorden et Snyder、大海馬 Hippocampus kuda Bleeker、刺海馬 Hippocampus histrix Kaup 和小海馬(海蛆) Hippocampus japonicus Kaup 的干燥體,有散結消 腫、溫腎壯陽等功效。三斑海馬(俗名龍落子), 隸屬我國國家二級保護動物,通常棲息在 1~100 公尺左右的具海藻床的礁石區中,也可生長在河海 交界處,喜食活餌,糠蝦、毛蝦、磷蝦、螢蝦等小 型浮游甲殼動物是其主要食物來源,其體色艷麗, 無毒,具有良好的觀賞價值。


    1 材料與儀器 


    1.1 材料 

    共收集海馬藥材樣品 13 份,分別購自 浙江磐安以及安徽亳州藥材市場,包括三斑海馬樣 品 12 份,寶珈海龍樣品 1 份,經浙江中醫藥大學 第一臨床醫學院葛宇清副研究員鑒定為三斑海馬 Hippocampus trimaculatus Leach 和寶珈海龍 Doryichthys boaja Bleeker。將所用樣品做好標記, 于干燥封口袋中避光保存,樣品保存于浙江中醫藥 大學藥學院。同時在 GenBank 數據庫中下載 20 條 COI、16 S 和 ATP6 序列(線紋海馬 H. kelloggi Jorden et Snyder 3 條,大海馬 H. kuda Bleeker 2 條,小海 馬 H. mohnikei Bleeker 3 條,刺海馬 H. histrix Kaup 2 條,太平洋海馬 H. ingens Girard 2 條,直立海馬 H. erectus Perry 2 條,虎尾海馬 H. comes Cantor 2 條,棘海馬 H. spinosissimus Weber 3 條,擬海龍 Syngnathoides biaculeatus Bloch 1 條)。 


    1.2 試劑 


    無水乙醇(上海凌峰化學試劑有限公司);海 洋動物組織基因組 DNA 提取試劑盒(天根生化 科技有限公司);瓊脂糖粉(BIOWEST);50×TAE 緩沖液[生工生物工程(上海)股份有限公司]; DL2000 DNA Marker(TaRaKa 公司);6×Loading Buffer(TaRaKa 公司,);4S Green 染料(BBI Life Sciences);10×PCR buffer(TaRaKa 公司);dNTP Mix(TaRaKa 公司);rTaq 酶(TaRaKa 公司); COI、16 S rRNA 和 ATP 引物由上海桑尼生物科 技有限公司合成。


    1.3 主要儀器設備 


    電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公 司];電熱恒溫水槽(上海森信實驗儀器有限公司); 超微量分光光度計(美國 Thermo 公司);鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠);微波爐 (格蘭仕微波生活電器有限公司);S1000TM Thermal Cycler(美國 Bio-rad 公司);凝膠電泳儀(美國 Bio-rad 公司);凝膠成像系統(美國 Bio-rad 公司); 離心機(杭州寶誠生物技術有限公司)。


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