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    豬肉水餃的非洲豬瘟病毒檢測-SSW-600-2S使用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-25 10:17【

    非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV) 引起的一種急性、烈性豬傳染病,發病率、致死率 可高達 100%,危害嚴重,對養豬業可造成毀滅性 打擊,可引起巨大的經濟損失和社會影響。ASF 自 2018 年 8 月在遼寧省首發以來,已在我國多個 省份發生。為進一步加強 ASF 防控,新疆地區 加強臨床監視、現場排查,對生豬從生產到屠宰全 程進行采樣監測,嚴格控制生豬及其產品調運監管, 多部門協調聯動,形成了良好的工作機制。

    1 材料

    1.1 樣品

    樣品來源:動物公路檢查站攔截的速凍豬肉 餡水餃,其中來源于 A 廠 13 個批次、B 廠 1 個批次; 在冷庫、超市中抽檢 B 廠速凍豬肉餡水餃 11 個批 次。樣品的采集、保存和運輸嚴格按照《非洲豬瘟 監測樣品采集、保存與運輸方法》中的要求,以 豬肉產品的批次為采樣單位,每批次按豬肉產品包 裝的規格(件 / 箱)隨機抽樣。數量為每批次隨機 抽取 10 件(箱),每件(箱)采集樣品 2 份,合 計每批次采集樣品 20 份。

    1.2 試劑

    天根磁珠法病毒 DNA/RNA 提取試劑盒(批號 S7327)、DNA 病毒反應液(批號 20181129): 購自北京世紀元亨動物防疫技術公司;TaqMan 探針、ASFV 特異性引物、提取陽性對照、反應陽性 對照:均由中國動物衛生流行病學中心提供。

    1.3 儀器設備

    上海博訊電熱恒溫水槽 SSW-600-2S、Bertin Precellys evolution 高通量組織研磨儀、Sigma3K-15 臺式冷凍高速離心機、天隆 NP968 自動核酸提取 儀、QuantStudio5 實時熒光定量 PCR 儀。

    2 方法

    2.1 樣品處理

    每批次每袋隨機挑取 2~3 個餃子,挑出其中 的豬肉進行剪碎。在加有陶珠的組織研磨管中, 加入 1 mL PBS 緩沖液,再加入剪碎的樣品約 100 mg,使用 Bertin Precellys 組織研磨儀進行勻 漿處理。處理后放入 60 ℃水浴鍋滅活 30 min,每 間隔 5 min 顛倒混勻樣品 1 次。

    2.2 病毒 DNA 提取

    對滅活后的樣品 4 ℃ 2 000 r/min,離心 10 min; 取 200 μL 上清液,使用磁珠法病毒 DNA 提取試 劑盒提取 DNA;將提取的核酸于 −20 ℃冰箱中保 存備用。

    2.3 熒光定量

    PCR 采 用 ASFV 特異熒光定量 PCR 方法擴增 ASFV VP72 基因片段 。PCR 以 20 μL 體系進行: DNA 病毒熒光反應液 10 μL、ROX 0.2 μL、無菌無 核酸水 5.7 μL、正向引物 0.8 μL、反向引物 0.8 μL、 TaqMan 探針 0.5 μL,模板 DNA 2 μL。同時,設立 提取陽性 / 陰性對照、反應陽性 / 陰性對照。密封 反應試管,瞬時離心,放入熒光 PCR 儀,按照熒 光 PCR 循環條件擴增。

    3 結果

    根據 ASFV 檢測操作規程分析,樣品 Ct 值低 于 40 為陽性。12 月 5 日檢測的 13 個批次樣品中, 有 5 個批次檢測到 ASFV 特異性擴增曲線,Ct 值 為 28.3~32.68(圖 1),其他批次熒光定量 PCR 檢 測結果見表 2。



    4 討論

    4.1 陽性豬肉產品的處置

    新疆畜牧獸醫局接到中國動物衛生流行病學 中心的復核確診后立即行動,要求動物衛生監督部 門會同食品藥品監管部門按照應急預案開展處置工 作,銷毀陽性樣品,并通知各級食品藥品監管部門、 畜牧獸醫等部門,對同批次產品進行無害化處理, 對相關場所進行徹底清洗消毒,同時繼續加強開展 ASF 疫情排查工作。

    4.2 加強流調溯源

    本次速凍豬肉水餃中 ASFV 核酸的確診在 國內是首次,能從豬肉產品中檢出 ASFV,說明ASFV 已形成了一定污染面。此次在速凍豬肉水餃 中檢出 ASFV 核酸,推斷是由于潛伏期帶毒豬沒 有臨床癥狀,屠宰后進入加工企業,被加工生產成 豬肉制品所造成的 。ASFV 自身較脆弱,對熱抵 抗力不強。雖然此類豬肉制品一般直接進入餐桌, 在蒸煮烹飪過程,均能將病毒殺死,但是水餃中豬 肉的溯源應引起主管部門的高度重視,這也是控制 疫病傳播風險的重要環節。水餃在烹飪過程中,如 果未對豬肉進行高溫處理,未煮熟的水餃會以餐廚 垃圾喂豬或進入養殖戶,很容易造成 ASFV 的傳播擴散 。其次如果在加工處理車間,人員、車輛、 污水、廢棄物處理不當,就有可能造成病毒擴散, 從而引發新的疫情 。因此,要加強產地檢疫和屠 宰場的實驗室檢測,及時發現發病豬和處于潛伏期 的豬,防止問題豬肉流入食品生產環節。

    4.3 繼續做好 ASF 防控

    目前國內 ASF 疫情仍呈點狀散發態勢,因豬 肉制品調入而傳播 ASF 的風險較高,因此應該警 惕通過污染病毒的豬肉制品而引發疫情的可能。 鑒于目前 ASF 防控形勢仍較嚴峻,今后仍需重點 排查養殖場、生豬交易市場、屠宰場等高風險場 點,同時加大公路檢查站對跨省入疆生豬和豬肉 產品的檢查和查處力度,嚴格控制從疫區調入生 豬及相關產品。

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