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    活菌數的變化規律研究-博迅生化培養箱使用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-18 11:24【

    枸杞是我國傳統的藥食同源性中藥藥材,性甘味平, 滋補肝腎、益精明目。枸杞原漿經乳酸菌發酵不僅會產 生豐富愉悅的風味而讓消費者更易接受,同時乳酸發酵帶 來的益生作用也提高了枸杞的藥用保健價值,為枸杞類飲 品市場擴展了更大的開發空間。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    枸杞(市售寧夏中寧枸杞);植物乳桿菌 360(Lactobacillus plantarum),四川高福記生物科技有限公司;無 水葡萄糖(食品級原料),山東保齡寶生物股份有限公司; D- 無水葡萄糖(標準品),中國藥品生物制品檢定所;硫 酸、苯酚、95% 乙醇、NaCl、MRS 固體培養基成分等試劑, 均為分析純。

    1.2 儀器與設備

    HM-928 料理機,廣州黑馬電器有限公司;電子天平, 梅特勒 - 托利多儀器(上海)有限公司;HH-4 水浴鍋,常 州國華電器有限公司;TD5M 臺式低速離心機,長沙湘智離 心機儀器有限公司;UV-1800 紫外 - 可見分光光度計, SHIMADZU CORPORATION;立式壓力蒸汽滅菌器,上海申 安醫療器械廠;超凈工作臺,濟南鑫貝西生物技術有限公司; 恒溫生化培養箱,上海博訊實業有限公司醫療設備廠;320 pH Meter,METTLER TOLEDO 公司。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 發酵工藝

    1.3.1.1 工藝流程

    干枸杞→料液比 1:6 →浸提→打漿(添加 5% 葡萄糖) →滅菌(105℃、15min)→冷卻、接種(萬分之八)→發 酵(37℃、40h)→成品→去籽、調配飲料。

    1.3.1.2 工藝要點

    原料處理:挑取顆粒均勻、飽滿的枸杞干果,用水沖洗 兩次以去除表面的雜質、灰塵等。 浸泡:以料水比 1:6 的比例,用溫水(40~50 ℃)浸泡 枸杞至變軟。 打漿:將浸泡后的枸杞料液加入 5% 葡萄糖一起進行打 漿、破碎。 滅菌:在 105℃下滅菌 15min,滅菌時間不能過長,否 則會破壞枸杞的色澤。 冷卻:采用自來水及時分段冷卻。 接種:采用植物乳桿菌菌劑進行直投式接種,接種量為原漿重量的萬分之八,將稱好的菌劑溶于少量無菌水后投入 原漿中。 發酵:在 37℃下發酵 40h,定期取樣。

    1.3.2 pH 值測定

    采用 pH 計進行測定,每隔 4h 取樣。 1.3.3 多糖測定 采用苯酚 - 硫酸法進行測定,每隔 8h 取樣。

    1.3.3.1 對照品制備

    葡萄糖(0.1mg/mL):準確稱取無水葡萄糖標準品 25mg,溶解后置于250mL 容量瓶中定容。

    1.3.3.2 標準曲線繪制

    取標準溶液 0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0mL 至具塞試管, 分別加水定容至 2.0mL,然后加 1mL5% 苯酚溶液,搖勻后 加入 5mL 濃硫酸(H2SO4)搖勻,靜置 10min。將具塞試 管放入水浴鍋(40℃)保溫 15min,迅速冷卻至室溫,放 置 20min 后在 490nm 下進行紫外吸光度的測定。

    1.3.3.3 供試樣品制備

    取 50mL 發酵前后的原漿離心,取上清液 3mL,加 入 30mL95% 乙 醇, 醇 沉 20min 后 離 心,4000r/min 離 心 20min;棄去上清液,用 85% 乙醇進行洗滌,最后加水 定容至 25mL;取 200μL 樣品測定吸光度。

    1.3.3.4 樣品多糖測定

    取 200 μL 樣品溶液至具塞試管,分別加水定容至 2.0mL,加 5% 苯 酚 溶 液 1mL, 搖 勻 后 加 入 濃 硫 酸 ( H2S O4)5mL 再次搖勻,靜置 10min;將具塞試管放 入水浴鍋(40℃)保溫 15min,迅速冷卻至室溫,放置 20min;在 490nm 下進行紫外吸光度的測定。

    1.3.4 活菌數測定

    采用平板(MRS 固體培養基)稀釋法,每隔 4h 取樣。

    1.3.4.1 樣品處理

    取發酵枸杞原漿 1mL,加入至 9mL 無菌生理鹽水 中,稀釋度為 10-1 樣液,按此方法依次將枸杞原漿稀釋到 10-6、10-7 樣液備用。

    1.3.4.2 乳酸菌計數

    取 稀 釋 度 為 10-6、10-7 發 酵 枸 杞 原 漿 1000μL 菌 液 涂 布 MRS 固體培養基上,然后置于 37℃恒溫培養箱中培養 48h,并記錄單菌落數,同時計算出活菌數。

    2 結果與討論

    在整個發酵過程中,發酵原漿的整體 pH 值呈下 降趨勢——起始 pH 值為 4.92,在 0~8h 之間下降不 明 顯 ,8 ~ 1 6 h 之 間 下 降 幅 度 最 大 ,1 6 h 之 后 趨 于 平 緩 , 發酵終點時 pH 值達到 3.58。究其緣由,主要是因為 枸杞原漿中的植物乳桿菌利用自身的酶類物質、通過 EMP 途徑降解了枸杞原漿中的碳水化合物(如葡萄 糖),進而發酵產生了大量有機酸(以乳酸為主), 增加了發酵原漿的酸度,降低了 pH 值。到終點時 pH 值得變化趨于平緩,主要是由于乳酸菌進入衰亡期, 產生的酸有所減少。植物乳桿菌的活菌數在發酵過程中的動態變化如,活菌數隨發酵時間的增加先升高后降低,生長趨勢 與束文秀等研究中乳酸菌的生長趨勢一致。在 0~16h 植物乳桿菌的生長速度較快,呈現上升趨勢;4h 之 前緩慢增長,在 12h 時接近達到了最高點,活菌數為 6.84×10 9 cfu/mL;12~28h 時生長平緩,處于穩定 期;28h 之后下降明顯。究其緣由,主要是由于發酵 原漿中碳源等營養物質的減少和代謝產物尤其是酸的 產生影響了乳酸菌的生長。整個發酵過程中,活菌數 均處于 10 8 cfu/mL 以上,說明枸杞對植物乳桿菌的 生長有促進作用。

    3 結論與討論

    考察了枸杞原漿在發酵過程中 pH 值、枸杞多糖 和活菌數的變化規律。結果表明,發酵過程中,pH 值和枸杞 圖 2 枸杞原漿在發酵過程中的枸杞多糖變化 多糖呈現下降趨勢,活菌數先上升后下降,最終 pH 值達到3.58、枸杞多糖含量達 1271.78mg/L、植物乳桿菌活菌數達 2.57×109 cfu/mL。如果將發酵好的枸杞原漿稀釋 100 倍調配 成枸杞飲料,其活菌數仍可達到≥ 106 cfu/mL 的乳酸菌活菌 飲品標準。

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