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    大鼠深靜脈血栓預防作用分析-滅菌器的使用!!

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-10-08 11:34【

    深靜脈血栓( deep vein thrombosis,DVT) 好發于下肢,常 繼發于手術、分娩、腫瘤等危險因素,尤其在骨科大手術后, 其發病率每年不斷上升。中醫藥在預防深靜脈血栓發揮 著重要作用。本實驗研究血府逐瘀湯對深靜脈血栓大 鼠模型血栓濕重的影響及血漿組織型纖溶酶原激活劑( t - PA) 、組織型纖溶酶原激活劑抑制物( PAI) 的影響。現將實 驗方法與結果報告如下。

    1 實驗材料

    1. 1 動物

    SPF 級 SD 雄性大鼠,50 只,體質量( 265. 83 ± 19. 53) g,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,動物 合格證號: 43004700012066。

    1. 2 藥物

    血府逐瘀湯藥物組成符合《方劑學》中要求 ( 由桃仁 12g、紅花 9g、當歸 9g、生地黃 9g、川芎 4. 5g、赤芍 6g、牛膝 9g、柴胡 3g、桔梗 4. 5g、枳殼 6g、甘草 6g 組成) ,由湖 南中醫藥大學第二附屬醫院藥劑科提供道地藥材并煎制。 制備方法: 蒸餾水浸泡 1h,煮沸 30min 后過濾取液,再加水 殘渣煮沸,如此反復操作 2 次,合并 2 次濾液,濃縮至每毫升 含生藥 0. 684g,熬制完畢,將中藥放于立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅BXM-30R)里滅菌,放入 4℃冰箱冷藏備用。低分子肝素鈉: 4000IU/支 ( Laboratoire AVENTIS,批號: H20030601 - 605) 。

    1. 3 儀器及試劑

    JY3002 型電子天平( 上海精密科學儀器有限公司) ; Elisa 試劑盒。

    2 實驗方法

    2. 1 動物分組及給藥

    將 50 只雄性 SD 大鼠隨機分成4 組, 血府逐瘀湯組( n = 13) : 灌胃血府逐瘀湯生藥 6. 84g /( kg·d) ; 低分子肝素鈉組( n = 13) : 每日肌內注射低分子肝素鈉, 600IU/( kg·d) ; 模型對照組( n = 13) : 灌胃用 0. 9% 氯化鈉 注射液 10ml /( kg·d) ; 假手術組( n = 11) : 灌胃用 0. 9% 氯 化鈉注射液 10ml /( kg·d) 。每組均給藥 7d。

    2. 2 模型制備

    給藥結束后對除假手術組外的其余 3 組參 照溫定文等方法建立深靜脈血栓動物模型。腹腔注射 1% 戊巴比妥鈉( 0. 1ml /20g) 麻醉大鼠后固定,腹部消毒后 沿其腹白線逐層打開腹腔,切口不能太大,下至凝固腺,上 至露出肝臟一角即可。將腹腔內小腸等器官拖出放置于大 鼠左側,暴露出下腔靜脈,動作要輕柔,避免損傷器官,拖出 的器官用浸潤過 0. 9% 氯化鈉注射液的紗布包裹,防止長期 置于空氣中造成脫水。移至體視顯微鏡下,鈍性分離血管 周圍結締組織,暴露下腔靜脈及其分支,在腎靜脈下方將腹 主動脈和下腔靜脈剝離開,然后用 7 /0 縫合線將下腔靜脈結 扎,之后逐個將其分支結扎。按解剖位置將腸道等器官放 回腹腔,在腹腔中加入 1% 氨芐溶液 0. 2ml,防止感染。用 5 /0 縫合線逐層縫合腹腔,術后置于 25℃ ~ 28℃ 的環境中, 直至大鼠復蘇,即可正常飼養。假手術組除不結扎下腔靜 脈及其分支外,其他操作同造模組。

    2. 3 觀察指標

    造模術后 72h 每組隨機取 5 只大鼠脫臼處 死,剖開腹部,移開小腸等器官,及時股動脈放血,分離血 漿,Elisa 試劑盒檢測 t - PA、PAI 水平; 暴露大鼠下腔靜脈, 置于體視顯微鏡下,截取下腔靜脈及分支靜脈結扎段,電子 天平稱取血栓濕重。 各組剩余大鼠于造模術后第 10 天脫臼處死,剖開腹部, 移開小腸等器官,及時股動脈放血,分離血漿,Elisa 試劑盒 檢測 t - PA、PAI 水平,并檢測其凝血常規及抗凝血酶Ⅲ 水平。

    2. 4 統計學方法

    實驗數據用 SPSS 21. 0 統計軟件包處 理。計量數據描述均采用均數 ± 標準差( x ± s) 表示,經正 態性檢驗( kolomogorov - smirnov 法) ,方差齊性檢驗后,若滿 足條件,組間差異采用多個樣本兩兩比較方差分析檢驗 ( LSD 法) 。若不滿足條件,組間差異采用多個樣本兩兩比 較秩和檢驗。P < 0. 05 為差異有統計學意義。

    3 實驗結果

    本組大鼠造模前無死亡,均造模成功,造模術后 2 只 ( 模型對照組和低分子肝素鈉組各 1 只) 死亡,死亡原因為 肺栓塞 1 只和腹腔內出血 1 只。

    3. 1 血栓濕重

    與假手術組相比,模型對照組濕重較重,差 異有統計學意義; 與模型對照組相比,低分子肝素鈉組、血 府逐瘀湯組血栓濕重較輕,差異均有統計學意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組比較差異無統計學意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組的抑制率均大于 30% ,提示有良好 的預防血栓形成的作用。( 見表 1)

    3. 2 血漿

    t - PA 和 PAI 水平 1) 血漿 t - PA。2 個時段組 內比較: 模型對照組與假手術組相比,差異無統計學意義; 與模型對照組相比,低分子肝素鈉組、血府逐瘀湯組血漿 t - PA含量較高,差異有統計學意義; 血府逐瘀湯組和低分 子肝素鈉組比較,差異無統計學意義。組內 2 個時段之間比 較: 同組術后 72h 與 10d 之間無明顯差異。說明低分子肝素 鈉組和血府逐瘀湯組有良好的促進血漿 t - PA 生成的作用, 但是對造模術后 72h 與 10d 之間的促進效果差別不大。 2) 血漿 PAI。2 個時段組內比較: 模型對照組與假手術組相 比,差異無統計學意義; 與模型對照組相比,低分子肝素鈉 組、血府逐瘀湯組血漿 PAI 含量較低,差異有統計學意義; 血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組比較,差異無統計學意義。 組內 2 個時段之間比較: 同組術后 72h 與 10d 之間無明顯差 異。說明血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組有良好的抑制血 漿 PAI 生成的作用,但是對造模術后 72h 與 10d 之間的抑制 效果差別不大。

    4 討 論

    血栓的形成是一個復雜過程,與血流動力學、血管壁、 血小板、凝血與纖溶活性等諸多因素有關。正常情況下,凝 血系統和抗凝系統處于動態平衡,如果凝血系統被激活,且 占優勢時,則出現血栓性疾病。血府逐瘀湯作為深靜脈 血栓防治的重要代表方之一,具有活血化瘀、行氣止血功 效。本實驗從預防深靜脈血栓理念出發,對 SD 大鼠造模前 預防性服用血府逐瘀湯或低分子肝素鈉,實驗結果顯示,在 血栓造模術后 72h 血府逐瘀湯組及低分子肝素鈉組血栓濕 重與模型組比較,差異有統計學意義,血府逐瘀湯組及低分 子肝素鈉組血栓濕重無差異,說明術前進行血栓防治干預 能夠有效減輕血栓的形成且血府逐瘀湯與低分子肝素鈉作 用無差異。t - PA 和 PAI 對機體纖溶系統活性起到重要的 調節作用。本實驗結果顯示,血府逐瘀湯組及低分子肝素 鈉組促進 t - PA 與抑制 PAI 生成均優于模型組,且在術后 72h 與術后 10d 2 個時段作用效果無明顯差異,說明術前進 行血栓防治干預能夠有效促進 t - PA 與抑制 PAI 生成,且作 用效果可持續一定時間。通過檢測造模后大鼠凝血相關指 標,發現其能夠刺激抗 AT - Ⅲ,縮短凝血時間。

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