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    小鼠抗疲勞性能分析-恒溫水槽的使用!!!

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-09-27 11:04【

    隨著社會高速的發展,生活節奏的加快、工作壓 力的增大,人們的機體與心理往往處于高度緊張的 狀態,因此疲勞越來越成為影響人們生活質量的重 要因素。疲勞作為一種在腦力或體力活動到達 一定階段時出現的正常的生理現象,是指機體生理 過程不能持續其機能在特定水平或整體不能維持預定的運動強度而出現的一種狀態,可以引起機體 運動能力降低、差錯事故增多、工作效率降低、戰斗 力減退、反應遲鈍、動作協調性降低。

    1 材料與方法

    1. 1 實驗材料

    成年雄性昆明種小鼠 96 只,平均體重( 24 ± 2) g( 泰邦生物科技公司提供) 。活性免疫球蛋白蛋黃 粉( 注: 低溫制備的免疫球蛋白蛋黃粉) 和缺乏活性 免疫球蛋白的蛋黃粉( 普通蛋黃粉) ( 注: 常規 180° C 以上高溫瞬間噴霧干燥方法制備的蛋黃粉) 均由 濰坊康奧思生物技術有限公司提供。血 尿 素 氮 ( BUN) 測試盒、全血乳酸( LD) 測試盒、糖元測試盒、 丙二醛( MDA) 測試盒均購自南京建成生物工程研 究所。UV754 分光光度計( 上海第三分析儀器廠) , DK-8D型電熱恒溫水槽(上海博迅提供),有機玻璃材質的 50 cm × 50 cm × 50 cm 游泳箱。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 活性免疫球蛋白的效價測定

    分別對活性 免疫球蛋白蛋黃粉、普通蛋黃粉和生理鹽水進行抗 雞新城疫病毒( NDV) 和禽流感病毒( AIV) 血清型 H9 抗原血凝抑制抗體( HI) 效價的測定。取活性 免疫球蛋白蛋黃粉和普通蛋黃粉各 1 g,充分溶解到 10 mL 生理鹽水中,然后分別取 50 μL 在 96 孔 V 型 版上做遞倍稀釋,每孔再加入同體積的 4 單位抗原, 混勻,置 37℃中和 1 h。抽取公雞血液,2 000 r/min 離心 5 min,去上清及表層白細胞,生理鹽水沖洗紅 細胞,繼續以上述條件離心,如此反復洗滌紅細胞 3 ~ 5 次收集紅細胞,以生理鹽水制成 1% 的紅細胞懸 液。抗原與樣品中和后加入 1% 的紅細胞懸液,置 37℃ 40 min 后觀察結果。

    1. 2. 2 小鼠分組及飼喂方法

    將 96 只小鼠適應性 喂養 1 w 后,按體重隨機分為 4 組,設低濃度組( 活 性免疫球蛋白蛋黃粉) 、高濃度組( 活性免疫球蛋白 蛋黃粉) ,蛋黃粉對照組( 普通蛋黃粉) 和空白對照 組 ( 蒸餾水) ,每組 24 只,每次實驗從對應分組中隨機抽取 8 只。組間體重差異無統計學意義。適應性 飼養觀察 5 d 后灌胃相應受試物,低、高濃度組分別 以 50 mg /( kg·d) 、100 mg /( kg·d) 的活性免疫球 蛋白蛋黃粉溶液灌胃,蛋黃粉對照組以 100 mg /( kg ·d) 的缺乏活性免疫球蛋白的蛋黃粉溶液灌胃,空 白對照組以同體積蒸餾水灌胃。實驗期間小鼠自由 飲水及攝食,連續灌胃 15 d 后進行各項抗疲勞指標 的測定。實驗開始及結束時用電子秤稱量小鼠體 重。

    1. 2. 3 小鼠力竭游泳實驗

    末次灌胃 30 min 后, 各組隨機抽取 8 只小鼠,于鼠尾根部固定其體重 5% 鉛皮,放入水溫為( 30. 0 ± 2. 0) ℃、水深 30 cm 的 恒溫游泳箱中,每個水箱 1 次放入 4 只小鼠。將小 鼠頭部沉入水中 10 s 內不返回水面視為力竭,用秒 表記錄自游泳開始至力竭死亡的時間,即小鼠的游 泳時間。

    1. 2. 4 小鼠全血乳酸測定

    末次灌胃 30 min 后, 各組隨機抽取 8 只小鼠,眼眶采血 0. 1 mL,然后負 重游泳( 負體重的 4% ) 10 min,休息 30 min 后再次 眼眶采血 0. 1 mL。試管編號,各管加入 0. 6 mL 蛋 白沉淀劑混勻,3 500 ~ 4 000 r/min 離心 10 min,取 上清液進行測定,具體步驟按相應試劑盒說明書操 作。

    1. 2. 5 小鼠血清尿素氮測定

    末次灌胃 30 min 后,各組隨機抽取 8 只小鼠,于 30℃ 的水中無負重 游泳 90 min,撈出小鼠擦干,休息 30 min 后拔眼球 采血約 0. 5 mL( 不加抗凝劑) 。放入 4℃冰箱中約 3 h,全血凝固后 2 000 r/min 離心 15 min,取血清備 用。血清中的尿素氮與二乙酰肟反應生成紅色物 質,根據色澤深淺來計算尿素氮含量,具體步驟按相 應試劑盒說明書進行。

    1. 2. 6 小鼠運動后肝糖原測定

    末次灌胃 30 min 后,各組隨機抽取 8 只小鼠,于 30℃ 的水中無負重 游泳 90 min,撈出擦干休息 30 min 后立即脫頸處死 小鼠,取新鮮肝臟標本經生理鹽水漂洗后,濾紙吸 干,稱重; 按樣本重量( mg) ∶ 堿液體積( μL) = 1∶ 3,一起加入試管中,沸水浴煮 20 min,流水冷卻; 將 糖原水解液進一步制備成糖原檢測液,具體步驟按 相應試劑盒說明書進行。

    2 結 果

    抗 NDV 和 AIV 血清型 H9 抗原血凝抑制抗體 ( HI) 效價的測定( log2 ) 如表 1,結果顯示: 活性免疫 球蛋白蛋黃粉對 NDV 和 AIV 血清型 H9 兩種抗原 的血凝抑制抗體( HI) 效價均很高,分別為達到 log2 的 7 和 9,但在普通蛋黃粉和生理鹽水對照組均未 檢測到抗體( 表 1) 。

    空白對照組、蛋黃粉對照組、低濃度組和高濃度 組小鼠 負 重 游 泳 時 間 分 別 為 ( 450. 38 ± 44. 48 ) 、 ( 482. 10 ± 72. 16 ) 、( 519. 25 ± 109. 99 ) 、( 3059 ± 885. 41) s,實驗組與空白對照組比較,小白鼠負重游 泳時間明顯延長,高濃度組尤為顯著,各實驗組與空 白對照組對比差異顯著( P < 0. 05 或 P < 0. 01) 。表 明活性免疫球蛋白蛋黃粉可以明顯延長實驗小白鼠 的負重游泳時間,即能夠有效提高小白鼠的運動耐 受能力。

    3 討 論

    疲勞是涉及多種生理生化因素的綜合過程,是 體力或腦力活動到一定程度時機體必然會產生的一 種正常生理現象,抗疲勞效果包含延緩疲勞的產生 和加快疲勞的消除。運動、生活、工作過程中,疲勞 的發生不可避免,針對疲勞問題,傳統的藥物干預, 可能對機體造成毒副作用。補充營養元素對疲勞進 行干預,是一種安全無毒副作用的有效措施。運動 過程中合理改善飲食,增加營養素的攝入,如蛋白 質、碳水化合物或脂肪酸等,可產生一定的抗疲勞效果。

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