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    高壓滅菌鍋的使用-血管壁巨噬細胞形成的影響分

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-09-25 10:45【

    動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是一種多因 素復雜的炎癥性疾病,是引起心血管類疾病的主要 原因。動脈粥樣硬化早期發生發展的兩個關鍵因 素是循環單核細胞跨內皮遷移進入血管壁及巨噬細 胞衍生泡沫細胞的形成。因此,抑制單核細胞遷 移、減少血管壁內巨噬細胞的形成對于抑制動脈粥 樣硬化的發生意義重大。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試劑

    人單核細胞株 THP-1 細胞,由上海生物科學研究所細胞資源中心提供,并在實驗室進行傳 代保株;體內實驗所用 ApoE-/-小鼠由上海 SLAC 實 驗室提供,許可證號:SCXK(上海)2017-0005;姜 黃素(生產批號:118-39-5,純度≥98%),西安天豐 生物科技有限公司;胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、 100 U·mL-1鏈霉素溶液,美國 Hyclone 公司;肉豆蔻 酸佛波酯(PMA),德國達姆施塔特,Calbichem; LPS,美國 Sigma 公司;TRIzol 試劑,美國 Invitrogen 公司;LS,北京艾德萊生物科技有限公司;高遷移 率族蛋白 B1(HMGB1)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1) ELISA 試劑盒,南京建成生物工程研究所;二異氰酸 酯試劑盒,美國 Thermo Science 公司;聚偏二氟乙烯膜 (Milli 孔隙),美國 Bedford 公司;脂質體 TMRNAiMAX 轉 染 試 劑 , 美 國 InvitrogenLife Technologies 公 司 ; RT-PCR 試劑盒、WB 試劑盒,賽默飛世爾科技(中 國)有限公司;逆轉錄試劑盒,美國 Thermo Fisher Science 公司;其他試劑均為化學分析純。

    1.1.2 儀器

    細胞計數器,美國 Nexcelom Bioscience LLC 公司;TriStar 2 LB 942 型多功能酶標儀,德國伯托公司;倒置顯微鏡,日本 Olympus 公司;紫外 可見分光光度計,北京萊伯泰科儀器有限責任公司;AR2130 型電子分析天平,上海梅特勒-托利多 有限公司;超低溫冰箱,美國 Thermo 公司;BXM50VD 型高壓滅菌鍋,上海博迅醫療生物儀器股份有 限公司;流式細胞儀,美國 Beckman Coulter 公司; J-2 000 型高速分散勻質器,常州丹瑞實驗儀器設備 有限公司;F3 型全自動熒光與可見光凝膠成像分析 系統,英國 Syngene 公司;Western Blot 蛋白顯影 儀,美國 Protein Simple 公司;低溫高速離心機,鹽 城凱特實驗儀器公司;生物組織自動包埋機,湖北 康龍電子科技有限責任公司;7500 型 RT-PCR 儀, 德國 Leica 公司。

    2 結果

    與空白對照組相比,LPS 組細胞遷移數量顯著增 加(P<0.01);與 LPS 組相比,姜黃素-20 組細胞遷 移數量顯著降低(P<0.05);姜黃素-40、姜黃素-80 組細胞遷移數量顯著降低(P<0.01)。提示在一定的 濃度范圍內,THP-1 細胞遷移量與姜黃素的給藥劑 量呈劑量依賴性降低趨勢。與空白對照組相比,LPS 組 細胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表達水平均顯著升高(P< 0.01);與 LPS 組相比,姜黃素-20 組細胞 HMGB1、 MCP-1 蛋白表達水平均顯著降低(P<0.05);姜黃 素-40、姜黃素-80 組細胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表 達水平均顯著降低(P<0.01)。提示 THP- 1 細胞HMGB1、MCP-1 蛋白表達與姜黃素的給藥劑量存在 一定負相關,即呈劑量依賴性降低趨勢。與空白對照組相比,LPS 組細胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表達水平均顯著升高 (P<0.01);與 LPS 組相比,姜黃素-10 組 MCP-1 mRNA 表達水平顯著降低(P<0.05);姜黃素-20 組 細胞 HMGB1 mRNA 表達水平顯著降低(P<0.05), MCP-1 mRNA 表達水平顯著降低(P<0.01);姜黃 素 - 40 組 、 姜 黃 素 - 80 組 細 胞 HMGB1、 MCP- 1 mRNA 表達水平均顯著降低(P<0.01)。說明 THP-1 細胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表達水平與姜黃素的給 藥劑量存在一定負相關關系,即呈劑量依賴性降低 趨勢。與空白對照組相比,LPS 組細胞 AMPK、PPARα 蛋白表達水平均顯著降 低,差異有統計學意義(P < 0.01),STAT3 蛋白表達 水平顯著升高,差異有統計學意義(P < 0.01);與 LPS 組相比,姜黃素-10 組細胞 AMPK 蛋白表達水平 差異無統計學意義(P > 0.05),PPARα 蛋白表達水 平顯著升高,差異有統計學意義(P < 0.05),STAT3 蛋白表達水平顯著降低,差異有統計學意義(P < 0.05);姜黃素-20 組細胞 AMPK 蛋白表達水平差異 無統計學意義(P > 0.05),PPARα 蛋白表達水平顯著 升高,差異具統計學意義(P < 0.05),STAT3 蛋白表 達水平顯著降低,差異具有統計學意義(P < 0.05); 姜黃素-40、姜黃素-80 組細胞 AMPK、PPARα 蛋白 表達水平均顯著升高,差異有統計學意義(P < 0.01),STAT3 蛋白表達水平顯著降低,差異有統計學意義(P < 0.01);說明 THP-1 細胞 AMPK、PPARα 蛋白表達水平與姜黃素的給藥劑量存在一定正相 關,即呈劑量依賴性升高趨勢,而 STAT3 蛋白表達 水平與姜黃素的給藥劑量存在一定負相關,即呈劑 量依賴性降低趨勢。

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