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    上海博迅細菌培養箱對胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-09-18 10:20【

    胃癌以高發病率、高病死率、高隱匿性為主要特征, 是常見的惡性腫瘤,發病率僅次于肺癌,患者確診時大 多為中晚期,已經失去了最佳手術的機會; 化療藥物由于 嚴重的毒副作用,很多患者不能耐受,并且免疫抑制、腫 瘤耐藥等因素也是限制療效的主要原因,故越來越多的 研究者將目光轉移到傳統醫學領域,以期找到低毒副作用、 高療效的藥物。六味安消散由堿花、大黃、山柰、訶子、 藏木香、寒水石 6 味藥材組成,具有解痙、化積消食之功 效,臨床上主要用于胃痙攣、胎衣滯留、大便秘結、胃腹 脹滿、食積不化等癥狀的治療,方中大黃、山柰、藏木 香、寒水石具有抗腫瘤作用,而堿花、訶子具有調節免疫 功能,但其抗腫瘤及免疫調節作用尚無報道。

    1 材料

    1. 1 動物與細胞株

    BalB/C 小鼠,清潔級,體質量 ( 20± 2) g,購于北京維通利華實驗動物技術有限公司,許可證 號 SYXK ( 京) 2017-0033。小鼠胃癌 MFC 細胞株由上海拜 格生物公司提供。

    1. 2 試藥

    六味安消散購于內蒙古民族大學附屬醫院蒙藥 制劑室,內藥制字 M13060034。噻唑藍 ( MTT) 檢測試劑 盒購于美國 Sigma 公司; 堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶免疫復 合物 ( APAAP) 購于上海鈺博生物科技有限公司; CD4、CD25 單克隆抗體購于美國 BD 公 司; 腫 瘤 壞 死 因 子-α ( TNF-α) 、白細胞介素-2 ( IL-2) 檢測試劑盒購于上海紀寧 生物科技有限公司。

    1. 3 儀器

    分析天平 ( 型號 BSM-120,上海卓精電子科技有限公司) ; 細胞培養箱 ( 型號 HPX-9052MBE,上海博迅醫療生物儀器股份有限公司) ; 紫外可見分光光度計 ( 型 號 UV-2102PCS,美國尤尼柯公司) ,全自動酶標儀 ( 型號 ELx800,美國寶特公司) 。


    2 方法

    取對數生長期 MFC 細胞,調整密度為 2×106 /mL,在小鼠右側腋下接種 0. 2 mL,1 周后可見米粒 大小腫瘤,提示建模成功。取建模成功的小鼠 60 只,隨機 分為模型組、5-氟尿嘧啶組 ( 0. 02 g /kg) 及六味安消散 高、中、低劑量組 ( 8、4、2 g /kg) ,每組 12 只,灌胃給 藥,1 次/d。給藥期間,每天稱定小鼠體質量,并觀察小 鼠毛發、食欲、精神等一般狀態給藥 14 d 后, 頸椎脫臼處死小鼠,小心剖取腫瘤、脾臟、胸腺,磷酸鹽 緩沖液沖洗殘留血跡,濾紙吸干,精密稱定質量,計算抑 瘤率及脾臟、胸腺指數。抑瘤率= [( 模型組瘤重-給藥組 瘤重) /模型組瘤重] ×100%,脾臟指數 =脾臟重/體質量, 胸腺指數=胸腺重/體質量。取各組小鼠脾 臟,去除脂肪和結締組織,剪碎,置于含 10%小牛血清的 RPMI-1640 培養液中,過 200 目細胞篩。低溫條件下加紅 細胞裂解液離心,Hank’s漂洗 3 次后,重懸于含 10%小牛 血清的 RPMI-1640 培養液中,APAAP 法測定細胞比例。給藥 14 d 后,小鼠摘眼球取血, 酶聯免疫吸附 ( ELISA) 法檢測外周血 TNF-α、IL-2 水平。 2. 5 統計學分析 通過 SPSS17. 0 軟件進行處理,數據以 ( x±s) 表示,2 組間比較采用 LDS-t 檢驗,多組間比較采用 單因素方差分析。以 P<0. 05 表示差異具有統計學意義。

    3 結果

    表 1 顯示,給藥前 各組小鼠體質量差異無統計學意義 ( P> 0. 05) ; 給藥后, 與模型組比較,5-氟尿嘧啶組小鼠體質量顯著下降,而六 味安消散組顯著增加 ( P<0. 05,P<0. 01) 。此外,模型組、 5-氟尿嘧啶組小鼠毛發暗淡,食欲不佳,精神萎靡; 六味 安消散組小鼠毛發光澤,食欲佳,精神良好。


    4 討論

    本實驗采用移植性腫瘤模型,它可保持機體完整性, 不影響外界環境和機體的正常聯系,是評價藥物抑瘤作用 及調節免疫功能的經典模型。給予 MFC 胃癌荷瘤小鼠六味安消散后發現,小鼠一般狀態好于模型組,體質量明顯 增加,瘤重下降,提示該藥物具有較好的抗腫瘤作用。惡 性腫瘤患者往往會出現免疫抑制情況,免疫抑制與預后、 臨床分期等關系密切,故提高機體免疫功能有利于增加抗 腫瘤效果。脾臟和胸腺對機體的免疫能力有標示作用,是 機體細胞、體液免疫的主要器官,其臟器指數能在一定水 平上評價機體免疫功能的高低,本實驗發現六味安消散 組小鼠脾臟、胸腺指數明顯增加,初步判斷六味安消散具 有提高免疫功能的作用。




     


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