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    蒸汽滅菌器在幽門螺桿菌培養結果的使用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-09-16 10:06【

    幽門螺桿菌是胃炎、消化性潰瘍和胃癌的重要致病因子。目前,臨床對幽門螺桿菌感染治療大多是經驗用藥,隨著感染人群中幽門螺桿菌耐藥菌株的 不斷增加,經驗性用藥治療失敗率越來越高。為指導 Ⅰ期臨床用藥,提高幽門螺桿菌治療精準性、敏感性, 迫切需要實驗室提供幽門螺桿菌培養和藥敏 結 果。 由于幽門螺桿菌需要在微需氧的特殊環境和較高營 養條件生長,實驗室培養成功率較低,使得許多醫院 都不愿開展幽門螺桿菌培養。近幾年來國內許多第 三方醫學檢驗機構針對臨床需求,紛紛開展幽門螺桿 菌培養和差異化服務。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    1.1.1 培養液種類

    幽門螺桿菌轉運培養基(固-液 雙相)購自珠海經濟特區益民生物工程制品廠(批號: 20180730);血瓊脂平板購自鄭州安圖生物工程股份 有限公司(批號:20180726B);苛養菌藥敏瓊脂平板購 自 鄭 州 安 圖 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 (批 號: 20180719B)。

    1.1.2 鑒定試劑

    VITEK MS-CHCA 基質購自生 物梅里埃公司(批號:1006062980);尿素酶購自杭州 濱和微生物試劑有限公司(批號:170103);觸酶和氧 化酶購自重慶龐通醫療器械有限公司(批號分別為: 18D0804和18D1805)。

    1.1.3 儀器

    梅里埃質譜儀 VITEK MS購自生物 梅里埃公司;TDR-Y100型微需氧培養儀和微需氧培 養氣體(10%二氧化碳+10%氫氣+氮氣平衡氣)購 自湖南長沙天地人生物科技有限公司;標本運輸箱購 自廣州賽信冷鏈冷藏科技有限公司;
    博迅YXQ-75SII立式壓力蒸汽滅菌器(非醫用); HSX-250型電熱恒溫恒濕箱購自中儀國科(北京)科 技有限公司;DW-86L338型-80 ℃超低溫保存箱購 自青 島 海 爾 特 種 電 器 有 限 公 司;DW-YW166A 型 -25 ℃冰箱購自中科美菱低溫科技有限責任公司; DW-YL450型4 ℃冰箱購自中科美菱低溫科技有限 責任公司;BSC-1500IIB2-X型生物安全柜購自山東濟 南鑫貝西生物技術有限公司;CX21FS1C 型生物顯微 鏡和 BX43F型攝像顯微鏡購自日本奧林巴斯公司。

    1.2 方法

    1.2.1 樣本制備原代幽門螺桿菌標準菌株

    ATCC43504以 TSB基質配制濃度為0.5麥氏濁度的 菌懸浮液(約1×108 CFU/mL)。按以下步驟進行連 續稀釋,(1)1∶00稀釋:吸取上述細菌懸液0.1 mL 加入9.9mLTSB中。(2)再1∶100稀釋:吸經(1)稀 釋后懸液0.1mL 加入9.9mL TSB 中。(3)再1∶ 100稀釋:吸經(2)稀釋后懸液0.1mL 加入9.9mL TSB中。此 時 幽 門 螺 桿 菌 濃 度 為 (100±10)CFU/ mL,然后將此濃度的幽門螺桿菌菌液加入運輸培養 基中,每支1mL,共75支。此試驗重復3次。

    1.2.2 樣本包裝

    將標本放置于特殊包裝箱中。包 裝箱必須具備,
    (1)主容器用足量的吸附性材料進行 包裹,以便在發生滲漏時可以吸收所有液體。
    (2)中 層包裝,為第2層耐用、水密性、防滲漏的包裝,把主 容器裝入其中并對其起保護作用。
    (3)外包裝,中層 包裝置于外包裝內,并加墊適宜的緩沖材料。外包裝 應能保護其內容物在運輸時不受外界的影響,如遭受 物理性損壞。外層容器的最小一面的尺寸≥10cm× 10cm。將制備完成的樣本放置于特殊包裝箱中進行 相關貯存試驗。

    1.2.3 樣本貯存

    把已接種菌液的幽門螺桿菌運輸 培養基分別置于4、25、35、-25、-80 ℃環境中,分別 存放6.0、12.0、24.0、48.0h后進行微需氧培養。

    1.2.4 樣本的運輸

    汽車運輸:將標本置于4 ℃冷 鏈運輸箱由本公司冷鏈運輸車運送至杭州金域醫學 檢驗所樣本接收組,并及時遞交至微生物室,所有樣 本存放總時間為7.0h后接種。在車上時間為6.0h。 火車運輸:將標本置于4 ℃冷鏈運輸箱,通過安檢并 進行交接登記。當日上午約9:00從杭州托遠,至下 午15:00左右樣本到達廣州高鐵站,由廣州運務組提 貨,在16:00前交接進入廣州金域標本組并及時遞交 至微生物室,所有樣本存放總時間為7.0h后接種,在 車上時間約為6.0h。飛機運輸:將標本置于4 ℃冷 鏈運輸箱,通過安檢并進行交接登記,由杭州經航空 運送到達廣州白云機場,并及時遞交至微生物室,所 有樣本存放總時間為7.0h后接種。在空中時間約為 2.5h。

    2 結  果

    固體培養到第3天時,幽門螺桿 菌生長良好,哥倫比亞血瓊脂平板上見透明、針尖樣 菌落形態;液體培養第3天時可見培養基明顯渾濁, 涂抹少量菌液于無抗菌藥物的哥倫比亞血瓊脂平板 培養,肉眼未見污染菌生長,并有透明、針尖樣的菌落長出;在無菌生理鹽水中:革蘭染色后細菌為革蘭陰 性,固體培養基中的幽門螺桿菌為螺旋狀、海鷗狀、s 狀彎曲菌或短桿菌;液體培養基中的幽門螺桿菌則多 為螺旋短桿狀,亦見部分長絲狀細菌,有的互相纏繞 聚集成團,有的散在分布,革蘭染色結果見圖1

    樣本貯存溫度與存放時間對結果有非常顯著性影 響。在24.0h內相同貯存時間以貯存4 ℃時培養陽 性率最高(40.4%±5.1%),與其他各組比較差異有 統計學意義 (P<0.05);在 貯 存 6.0h 以 內 以 貯 存 25 ℃時陽性率最高(71.2% ±8.1%),與 35、-25、 -80 ℃比較,差異有統計學意義(P<0.05)。不同貯 存時間以-80 ℃結果最穩定,結果見表1。

    3 討  論   

    幽門螺桿菌為革蘭染色陰性無芽胞、呈螺旋狀彎 曲的桿菌,不僅寄生于胃腸道,而且在口腔及呼吸系 統均分離到細菌,在人群中感染率達50%以上。據報 道,幽門螺桿菌感染是消化系統慢性炎癥、胃部潰瘍、 胃黏膜淋巴組織異常和淋巴瘤的主要致病菌和胃癌 的一級致癌因子。目前對幽門螺桿菌感染診斷方法種類眾多,不同方法檢出的陽性率差異明顯,有許 多確定性方法如病理檢查、基因診斷等。但如果進 行致病機制、細菌分型、耐藥菌株、疫苗制備等研究, 幽門螺桿菌培養法是“金標準”。




     


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