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    生物安全柜對益氣養陰方含藥血清聯合化療藥物

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-09-09 10:27【

    白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病。 治療白血病的方式主要是采用聯合化療,但其毒副 作用也很明顯。依據中醫學對白血病的認識,擬益氣養陰方,由益氣和養陰的中藥組成,無清熱解毒 類的中藥,毒副作用更小。制備大鼠含藥血清,聯 合化療藥阿糖胞苷、喜樹堿、紫杉醇,共同作用于人 白血病細胞系 KG1α 細胞,CCK8 檢測其活性,觀察 對 KG1α 細胞增殖的影響。



    1 材料

    1. 1 動物和細胞株


    8 周齡、清潔級雄性 Wistar 大 鼠 36 只,體質量( 200 ± 20) g,由上海斯萊克實驗動物有限公司提供,許可證號碼: SCXK( 滬) 2017 - 0005。實驗室溫度 22 ~ 25 ℃、12 h 明暗循環,大鼠 自由飲水攝食。實驗程序遵循美國《實驗動物護理 和使用指南》 ( 《Guide for the Care and Use of Laboratory Animals》簡稱 Guide,NRC 2011) 。KG1α 細 胞株: 購于北納生物的 BNCC 細胞庫。



    1. 2 藥物及試劑

    益氣養陰方: 黃芪 30 g、太子參 30 g、女貞子 21 g、旱蓮草 18 g、麥冬 15 g,藥材由杭 州華 東 醫 藥 提 供; 水 煎 2 次 合 并 濾 液,濃 縮 至 1. 14 g /mL,冷卻后,分裝,置于 4℃ 冰箱保存備用。 胎牛血清: Hyclone Company; IMDM 培養基、胰酶及 雙抗: GIBCO Company; CCK8 試劑盒: 日本同仁化學 社; 喜 樹 堿: Aladdin,C111281 - 20MG; 阿 糖 胞 苷: Aladdin,C111218 - 5G; 紫 杉 醇: Aladdin,P106868 - 10MG。



    1. 3 實驗儀器

    Sorvall ST16R 臺式高速冷凍離心 機: Thermo 公司; Sorvall ST16R 臺式低速離心機: Thermo 公司; 3111 型二氧化碳 培 養 箱: Thermo 公 司; 細胞培養瓶: Fisher Scientific 公司; 細胞培養皿: Fisher Scientific 公司; 微量加樣器: RAININ 公司; 渦 旋振蕩儀: Bio - Rad 公司; ECLIPSE Ti - S 型倒置顯 微鏡: Nikon 公 司; 博迅BSC-1000A2生物安全柜: 1681130 - 4B 酶標儀: Bio - Rad 公司。



    2 方法

    將大鼠隨機分為空白對照 組和含藥血清組,根據“動物與人體的每千克體質 量劑量折算系數表”計算大鼠灌胃劑量,成人與大 鼠的折算系數按 6. 25 計算,大鼠灌胃劑量 1 mL / 100 g,分 2 次給藥( 每日上午 9 時和下午 15 時兩次 灌胃) ,空白組給予等量生理鹽水; 連續灌胃 5 d。 末 次 給 藥 2 h 后。大 鼠 稱 重,10% 水 合 氯 醛 ( 3. 8 mL / kg) 腹腔注射麻醉,心臟穿刺取血,滅活, - 20℃保存備用。取正常培養處于對數 生長期的 KG1α 細胞,800 r /min 離心 5 min,計數板 下計數,調整細胞密度為 5 × 104 個/mL,鋪 96 孔板, 每孔均加入0. 1 mL細胞懸液,即 5 × 103 個/well。將 含藥血清分為 5% 、10% 、15% 、20% 4 個濃度; 化療 藥物 作 用 濃 度: 阿 糖 胞 苷 160 mg /L,喜 樹 堿 0. 1 mg /L,紫杉醇 50 mg /L。設置組別為: 空白對照 組、空白血清對照組、含藥血清組( 5% 、10% 、15% 、 20% ) 、各化療藥物聯合空白血清組、化療藥聯合 15% 含藥血清組。藥物作用細胞 0、12、24、48、72 h。藥物作用細胞 0、12、 24、48、72 h 后,每孔加入 10 μL CCK8 檢測液的工 作液,設置空白對照孔,37 ℃ 避光反應 2 h,450 nm 處讀取各孔 OD 值。實驗結果按下式計算: 細胞存 活率 ( % ) = 實 驗 組 OD 值/空 白 對 照 組 OD 值 × 100%所有數據采用平均數 ± 標準差 ( x ± s) 表示,應用 GraphPad Prism 6 統計軟件,對所 得數據進行單因素方差分析制圖,方差不齊者,將 數值取對數值后進行方差分析。P < 0. 05 表示差異 有統計學意義。



    3 結果

    見圖 1。5% 、10% 、15% 、20% 含 藥血清對 KG1α 細胞從 12 h 即出現不同程度的增 殖抑制,隨著時間的推移,抑制效果有所減弱,以 15% 含藥血清的抑制效果最為明顯。不同濃度含藥 血清聯合化療藥對細胞均顯示出不同程度的抑制 作用。




    4 討論


    阿糖胞苷( cytarabine,Ara - C) 是一種核苷類似 物,是血液腫瘤尤其是急性髓細胞白血病( acute myelocytic leukemia,AML) 誘導和鞏固治療的常規藥 物。在不同的方案中應用劑量不同,在 AML 的鞏固治療中,大劑量的阿糖胞苷可以達到明顯的治療效果。但是隨著劑量越大,胞漿濃度越高,產生的 毒性就越大。






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