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    電熱恒溫培養箱在大鼠的抗血栓作用研究的使用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-26 10:25【

    由血栓引起的急性心肌梗死、腦卒中等心腦血 管疾病,嚴重危害著人類健康和生命。從海洋生物 體內尋找和開發抗凝血和抗血栓活性物具有廣泛的 應用前景。隨著人們對海洋多糖抗凝血、抗血栓、降血脂及其他藥理活性研究的不斷深入,多糖已成 為生物醫藥和化學領域共同關注的熱點,硫酸多糖 因其具有強陰離子性,可表現出不同程度的抗凝血活性。



    1 試驗材料

    1.1 試驗動物


    SPF 級 Wistar 大鼠,雄性,體質量 180~200 g, 購自北京維通利華實驗動物技術有限公司,許可證 號 SCXK(京)2012-0001。飼養于天津藥物研究院 新藥評價有限公司動物實驗樓(屏障環境, AAALAC 認證)。溫度 20~26 ℃,相對濕度 40%~ 70%,不少于 15 次/h 全新風,晝夜明暗交替時間為 12 h/12 h。



    1.2 藥物與試劑

    FV,產品批號 20120301,由深圳海王藥業有 限公司提供,平均相對分子質量為 11 000~15 000; 低分子量肝素鈣注射液(LMWHC),產品批號 12105049,規格 0.4 mL∶4 100 AxaIU,由葛蘭素史 克提供。



    1.3 主要儀器

    G&G T2000 型電子天平由美國雙杰兄弟(集 團)有限公司提供;PL203 型電子天平,由梅特勒 托利多儀器(上海)有限公司提供;SDZ-A1 型體 外血栓形成儀由無錫縣電子儀器二廠提供; HPX-9052MBE 型電熱恒溫培養箱由上海博迅實業有限公司醫療設備廠提供。



    2 方法

    2.1 FV 對大鼠下腔靜脈血栓形成的抑制作用


    前期預試驗對 FV 的劑量及作用時間做了探 索,最終將 FV 的劑量設定為 20、10、5、2.5、1.25、 0.63 mg/kg,LMWHC 的臨床日使用量為 38 IU/kg, 人按 60 kg 計,大鼠按 200 g 計,按體表面積折算大 鼠的臨床等效劑量為 213 IU/kg,依此對其設定劑量 進行本研究。 參考 Reyers 法將 Wistar 大鼠隨機分為對照 組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組,每組 10 只,給藥體積為 5 mL/kg。大鼠以 1% 戊巴比妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后,尾靜脈給予 相應受試品,對照組給予生理鹽水。15 min 后大鼠 腹部碘伏消毒,沿腹正中切開大鼠腹壁,分離下腔 靜脈,并于左腎靜脈下方預置絲線結扎下腔靜脈,關閉縫合腹腔,結扎 4 h 后重新打開腹腔,于結扎 線下方 2 cm 處夾閉血管,同時結扎靜脈側枝,縱行 剖開血管,觀察有無血栓形成,若血栓形成,用濾 紙吸去殘血稱血栓濕質量后,放置于烘箱內烘干, 再稱量血栓干質量。計算血栓抑制率(IR)。 IR=(對照組血栓質量-給藥組血栓質量)/對照組血 栓質量



    2.2 對大鼠體外血栓形成的抑制作用

    參考 Chandler 體外血栓法將 Wistar 大鼠隨機 分為對照組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組,每組 10 只,給藥體積為 5 mL/kg。大 鼠以 1%戊巴比妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后,尾靜 脈給予相應受試品,對照組給予生理鹽水,15 min 后沿腹正中切開大鼠腹壁,腹主動脈迅速采血 1 mL 注入硅化的塑料管中放入血栓形成儀中,于 37 ℃ 下 18 r/min 旋轉 15 min 后自環內傾出血栓,用濾紙 吸干殘血,稱取血栓濕質量,血栓放置于烘箱內烘 干再稱量血栓干質量。計算血栓抑制率(IR)。 IR=(對照組血栓質量-給藥組血栓質量)/對照組血 栓質量



    2.3 對大鼠動靜脈旁路血栓形成的抑制作用

    依完全隨機法將 Wistar 大鼠分為對照組、FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組和 LMWHC 213 IU/kg 組, 每組 9 只,給藥體積為 5 mL/kg。大鼠以 1%戊巴比 妥鈉 5 mL/kg 腹腔注射麻醉后,尾靜脈給予相應受 試品,對照組給予生理鹽水。頸部碘伏消毒,仔細 分離右側頸總動脈和左側頸外靜脈,頸外靜脈先結 扎靜脈遠心端,于近心端剪開一小口,將事先準備 好聚乙烯管(管中放置一根預先稱重的 4 號縫合線 約 6 cm,并將 50 U/mL 肝素溶液充滿管腔)向近 心端插入并結扎固定。右側頸總動脈先用血管夾夾 住近心端,剪開一個小口,將管向近心端插入并結 扎固定。給藥 15 min 后放開血管夾計時 15 min, 之后將線取出稱量濕質量、干質量。計算血栓抑制 率(IR)。 IR=(對照組血栓質量-給藥組血栓質量)/對照組血 栓質量



    2.4 統計學方法

    計量資料均以?x±s 表示,應用 SPSS 20.0 統計 軟件分析。先進行方差齊性檢驗,方差齊時以單因 素方差分析進行整體比較,兩兩比較采用 t 檢驗; 方差不齊采用非參數檢驗進行整體比較,兩兩比較 采用 Kruskal-Wallis 檢驗。



    3 結果

    與對照組比較,FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組均 能夠明顯降低大鼠下腔靜脈的血栓濕質量和干質量 (P<0.05、0.01),陽性藥 LMWHC 組能夠明顯降低 大鼠下腔靜脈的血栓干濕質量(P<0.01)。FV 對血栓濕質量的抑制率最高可達 77.3%,對血栓干質量 的抑制率最高可達 74.9%。劑量相關性的線性擬合方 程分別為 Y=−0.377X+11.70(r=0.978)、Y= −0.173X+5.62(r=0.901),劑量相關性較好,提示 FV 有明顯的抑制靜脈血栓形成的作用。與對照組比較,FV 20、10、5、2.5 mg/kg 組均 能夠明顯降低大鼠體外形成的血栓濕質量(P< 0.05、0.01),FV 20、10、5 mg/kg 組均能夠明顯降 低大鼠體外形成的血栓干質量(P<0.05、0.01)。 陽性藥 LMWHC 組能明顯降低大鼠體外形成的血栓 干濕質量(P<0.01)。FV 對血栓濕質量的抑制率最高可達 94.3%,對血栓干質量的抑制率最高可達 96.6%。劑量相關性的線性擬合方程分別為 Y= −0.002 X+0.061(r=0.997)、Y=−0.000 1 X+0.015 (r=0.768),血栓濕質量的 r 值為 0.997,劑量相關 性明顯,而血栓干重質量的 r 值為 0.768,劑量相關 性稍差,提示 FV 具有抑制體外血栓形成作用。



    4 討論

    血栓性疾病是一類嚴重危害人類健康的疾病, 其發病率和死亡率都很高,目前國內外都在尋找組 成均一、活性專一,且相對分子質量小、抗凝血活 性低而抗血栓作用較強的新型類肝素藥物,發現巖 藻多糖具有上述特點,其藥理活性及機制已經多方 面的報道。FV 是從海帶等褐藻中提取出來的巖 藻聚糖硫酸酯,經過化學降解、修飾而得到的陰離 子物質。本文對其抗血栓活性進行了研究。靜脈血栓主要由于血流緩慢或瘀滯、凝血因子 聚集而導致血液凝固,所有凝血酶的激活是主要因 素之一。結扎大鼠下腔靜脈使血流瘀滯,啟動內源 性凝血系統,促進靜脈血栓的形成。



     


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