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    恒溫培養箱對干擾素釋放實驗的使用

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-23 13:47【

    結核病是一種由結核分枝桿菌(MTB)感染引起 的傳染病,嚴重危害著人類的生命健康。根據世界衛 生組織(WHO)2017年全球結核病報告顯示,2016年 全球結核病發病的人數為1040萬,中國是全球30個 結核病高負擔國家之一。此外,在我國甲、乙類傳 染病病死率中,肺結核排名第2位,其實驗室診斷率 不足40%。由于結核病的診斷較為復雜,既往的細 菌病原體檢測、結核菌素皮膚試驗(TST)、抗結核抗 體檢測及影像學檢查等診斷方法遠遠不能滿足臨床 需求。經過不斷地研究,以 T 淋巴細胞免疫為基礎 的體外γ-干擾素釋放試驗(IGRAs)近年來在臨床得 到廣泛應用。IGRAs檢測的基本原理是 MTB 特異 性抗原-早期分泌抗原6(ESAT-6)和培養濾液蛋白10 (CFP-10)在體外刺激全血中的 T 淋巴細胞產生 γ干 擾 素 (IFN-γ),通 過 酶 聯 免 疫 吸 附 測 定 實 驗 法 (ELISA)測 定 IFN-γ 水 平 來 判 斷 受 檢 者 是 否 感 染 MTB。雖然IGRAs已成為國內外結核診療指南推薦 的重要實驗室檢測方法,是臨床診斷結核病的重 要輔助手段,但在檢測過程中,除了有陰性結果、陽性 結果外,還會產生一定比例的不確定結果(ITRs)。



    1 資料與方法

    1.1 一般資料


    回顧2014年7月至2018年7月在 本院1781例可疑結核感染患者或需排除結核感染患 者的IGRAs檢測結果,年齡為(48.23±19.84)歲,其 中男1139例,女642例。按不同年齡分為3組,<18 歲組163例,18~65歲組1100例,≥65歲組518例。



    1.2 儀器與試劑

    IGRAs試劑盒(北京萬泰生物藥 業股 份 有 限 公 司),恒溫培養箱 (上海博迅公司), MutiskanFC酶聯免疫檢測儀(賽默飛世爾儀器有限公司)。



    1.3 方法

    1.3.1 IGRAs試驗


    嚴格按照試劑盒說明書操作。 采集4mL肝素鋰抗凝靜脈全血,2h之內送至實驗 室。按 每 管 1 mL 全 血 分 裝 至 本 底 對 照 培 養 管 (N 管)、測試培養管(T 管)、陽性對照培養管(P管),輕 柔顛倒混勻5次后,將培養管直立于37 ℃恒溫箱中, 溫育22~24h。將培養后的培養管以3000r/min,離 心 10 min,通 過 ELISA 檢 測 上 清 液 中 的 γ-干 擾 素 (IFN-γ)水平,酶標儀在波長450nm 處測定其吸光度A,根據試劑盒中校準品制作標準曲線,計算IFN-γ 水平。



    1.3.2 實驗室質量控制

    由6個標準液的吸光度 A 值與相應濃度計算得出的相關系數(r)≥0.99;400 pg/mL的標準液的平均吸光度A 值<1.0。 1.3.3 判斷標準 所得不確定結果均需重新采集樣 本復查,以排除實驗因素引起不確定結果,復查后仍 為不確定,則判定為不確定結果。



    1.4 統計學處理

    回顧2014年7月至2018年7月 例患者的IGRAs檢測結果,用 Excel2007軟件建立 數據庫,用SPSS22.0軟件進行統計分析。計數資料 用百分率表示,組間比較用χ 2 檢驗,采用二元Logistic 回歸進行單因素與不確定結果的分析,P<0.05表示 差異有統計學意義。



    2 結  果

    1781 例IGRAs檢測樣 本,陽性569例(31.95%),陰性1151例(64.63%), 不確定結果61例(3.43%)。1781 例IGRAs檢測樣本中,男性1139例,女性642例,男 性陽性率為33.45%,女性陽性率為29.28%,差異無統計學意義(χ 2=3.208,P=0.075);男、女患者ITRs 分別 為 3.34%,3.58%,差 異 無 統 計 學 意 義 (χ 2 = 0.073,P=0.784)。1781 例IGRAs檢測樣本中,<18歲組的患者IGRAs陽性 率明顯低于18~65歲組和≥65歲組,差異有統計學 意義(χ 2 =28.448,P=0.000);與 18~65 歲 組 比 較,<18歲組和≥65歲組ITRs發生率較高,差異均 有統計 學 意 義 (χ 2 值 分 別 為 10.584、9.015;P = 0.001、0.003)。<18歲組和≥65歲組ITRs發生率 比較,差異無統計學意義(χ 2 =0.722,P=0.396)。


    對61例可疑結核感染患者IGRAs的ITRs標本進行 回訪,剔除4例資料不全患者,經二元logistic回歸分 析,自身免疫性疾病(OR 為2.84;95%CI 為1.50~ 5.39;P=0.001)、HIV 感染患者(OR 為3.04;95% CI為 1.26~7.35;P=0.013)的ITRs與確定結果 (陰性/陽性)差異有統計學意義(P<0.05)。



    3 討  論

    目前,大量研究評估了IGRAs在疑似結核病患者診斷中的臨床應用價值,而較少研究IGRAs檢測中 出現的不確定結果。DIEL等研究顯示,IGRAs的不確定結果發生率在3%~21%,不確定的結果可能限 制IGRAs使用的有效性,影響結核病的診斷和治療。 因此,除了關注IGRAs檢測的陰性或陽性結果之外, 還應重視IGRAs不確定結果發生的比例和原因,為 臨床疾病的診斷和治療提供幫助。綜上所述,通過回顧分析本院檢測的可疑結核感 染患者或需排除結核感染患者IGRAs的不確定結果 發生的比率及原因,發現不確定結果發生不僅與年齡 因素關系密切,還與患者的免疫功能狀態或免疫抑制 劑的使用密切相關。



     


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