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    霉菌培養箱在藥制劑婦科洗的體外抑菌作用的使

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-08-21 11:01【
    0 引言

    近年來,隨著抗菌藥物的廣泛應用,使耐藥細菌不斷增 加,其耐藥性也隨之增強,導致感染性疾病例數增多,嚴重 威脅到人類的生命健康,許多天然藥物具有抗病、低毒、不 易產生耐藥性等特點與優勢,開展中藥抗菌的應用和研究, 對于細菌性疾病的防治具有重要意義。婦科洗是我院根據 臨床驗方研制的中藥制劑,主要由苦參、苦樹皮、千里光、 銀花藤、魚腥草、野菊花、關黃柏、蛇床子等中藥組成。有 抗菌、消炎的作用,具較好的臨床療效。本實驗通過測定婦 科洗對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)、 大 腸 埃 希 菌( Escherichia col,E.coli)、 白 色 念 珠 菌( Candida albicans,C.albicans)的 MIC 和 MBC,分析婦科 洗對不同菌株的最低抑菌濃度,進行抑菌效果評價,研究中 藥方劑對常見的陰道炎致病菌的體外抑菌活性,為臨床應用 提供科學依據。



    1 實驗材料

    1.1 受試菌株


    標準菌:金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、 大腸埃希菌(ATCC25922)、白色念珠菌,由廣西柳州市中 醫醫院微生物室分離鑒定。



    1.2 藥物與試劑

    婦科洗制劑(柳州市中醫醫院制劑室,批準 文號:桂藥制字 Z02060095,批號:20160811);氯化三苯四氮唑(triphenyltetrazoliumchloride,TTC,中國華東師范大 學化工廠,批號:20101026);無水乙醇(成都市科龍化工試 劑廠,批號:2016042801);氯化鈉注射液(浙江國鏡藥業有 限公司,批號 :C116080303);沙氏葡萄糖瓊脂培養基(廣東 環凱微生物科技有限公司,批號:3104864);沙氏葡萄糖液體 培養基(廣東環凱微生物科技有限公司,批號:3104833);營 養瓊脂(廣東環凱微生物科技有限公司,批號:3103446);營 養肉湯(廣東環凱微生物科技有限公司,批號 :3103278)。



    1.3 實驗儀器

    DH64 型電熱恒溫干燥箱(上海市躍進醫療器械一廠),DNP-9162BS-III 型電熱恒溫培養箱(上海市新苗醫療器械有限公司),MJX-100B-2 型霉菌培養箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠),JA5003N 電子天平(上海精密科學儀器有限公司)。



    2 實驗方法與結果

    2.1 藥物的配制


    取婦科洗 1 瓶(344 mg/mL),文火濃縮 至 86 mL,此時得到藥液濃度為 1000 mg/mL,對藥液進行 滅菌備用。在無菌條件下,將婦科洗藥液用孔徑 0.22 um 無 菌濾頭過濾除菌,用生理鹽水按照倍比稀釋法將藥液稀釋成 1000 mg/mL、500 mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、 62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.625 mg/mL、7.813 mg/ mL、3.906 mg/mL、1.953 mg/mL 的濃度梯度。



    2.2 待測菌液的制備

    用接種環分別取金黃色葡萄球菌、大 腸埃希菌、白色念珠菌菌落,用 0.9% 的生理鹽水校正濃度至 0.5 麥氏比濁標準,再用營養肉湯(金葡菌、大腸菌)或沙氏 葡萄糖液體培養基(白念)以 1:100 倍數稀釋備用(含菌量約 106CFU· mL-1)。



    2.3 MIC 及 MBC 的測定

    參考美國臨床試驗室標準委員會 (CLSI)所公布的標準 (CLSI,2007),采用微量稀釋法 測定各樣品對不同菌株的 MIC 值。用微量加樣器分別取各個 濃度的藥液 50μl,依次由低到高濃度加到 96 孔板中并做好 標記。再取 50μl 的各個菌液加入到 96 孔板中,使每孔接種 菌量約 5×105CFU·mL-1 個菌。同時每個實驗菌組設無菌對 照組和無藥對照組。無菌對照孔內加 100 μl 營養肉湯,其中 白色念珠菌組加沙氏葡萄糖液體培養基;無藥對照孔內只加 50 μl 營養肉湯和 50 μl 菌液。將 96 孔板振蕩 1 分鐘,使孔 內菌液與藥液混勻后用封口膠密封好,置于 35℃的恒溫培養 箱孵育(白色念珠菌組于 25℃恒溫培養箱孵育)。24 小時后, 每孔加入 1% 氯化三苯四氮唑(TTC)5 μl,在恒溫箱內孵 育 3 小時后取出觀察各孔顏色變化,有細菌生長孔顯紅色, 不顯紅色的最低藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。觀察藥 物 MIC 以上未見細菌生長的各孔,用移液槍移取 50 μl 至不 含藥物的營養瓊脂培養皿中,白色念珠菌移種至沙氏葡萄糖 瓊脂培養皿,分別置于 35℃和 25℃的培養箱內孵育。24 小 時后觀察培養皿上有無細菌生長,計數少于 5 個菌落的為該 藥的最低殺菌濃度(MBC)。



    3 討論

    本實驗結果表明,婦科洗藥液對白色念珠菌表現出較 好的抗菌活性,婦科洗從藥性理論上來看,組方藥材性味苦 寒,歸膀胱經,與腎相表里,功效抗菌、消炎。用于婦科各 種炎癥,即婦科洗的藥效作用部位在陰道,陰道炎常見致病 菌為白色念珠菌,抑菌試驗結果與臨床辨證歸經理論相一 致。與西藥或抗菌藥物相比,中藥可辨證論治,療效穩定且 較好、副作用極少,患者易接受。恢復正常的陰道微生物生 態環境是治愈陰道病的根本,中藥對陰道炎的治療恰好從這 個目的出發。 本實驗采用三種常見的菌株進行實驗,菌株存在局限性, 對細菌、真菌的抑制作用不全面,另婦科洗藥液為中藥組方, 下一步將對抑菌活性成分進行分離純化,明確抑菌的物質基 礎,擴大中藥的臨床藥效價值,對開發民間中藥資源的臨床 應用提供參考。 陰道炎是困擾女性身體健康的主要疾病之一,屬祖國醫 學“陰癢”、“帶下病”的范疇。臨床西藥治療以抗菌藥物、 抗真菌治療為主,隨著細菌、真菌耐藥情況越來越嚴峻,臨 床可選擇的抗菌藥物越來越少,而且存在用藥周期長、肝功 能損害、復發率高等弊端。抗菌中草藥的研究,尤其是清熱 燥濕中藥已成為近年來該領域的研究熱點。我院婦科洗不僅 對白色念珠菌、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌具有良好的抑 菌效果,對皮膚溫和、無毒無刺激,且具有一定的消炎、鎮 痛作用,適用于婦科疾病預防及治療,具有良好的市場應用 和開發價值。



     


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