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    大鼠體內硝苯地平藥動學的分析(HPX-9052MBE使用)

    返回列表 來源:未知 發布日期:2019-11-26 09:34【

    硝苯地平是當今治療心腦血管疾病最常見的一線藥物,主要用于高血壓、心律失常、心絞痛等病的治療。 該藥在發揮藥效的同時,常常會引起轉氨酶升高、黃疸 等藥物性肝損傷。甘草是一種歷史悠久、應用廣泛的 中藥,在方劑中常作為使藥,有“無甘草不成方”之說,在 中醫經方《傷寒論》一百一十三方中,多達七十七方含有甘草。

    1 材料

    1.1 儀器

    LC-20 高效液相色譜儀(包括 LC-20A 真空在線脫 氣機、LC-20AT四元泵、CTO-10 AS柱溫箱、SPD-M20 A 檢測器)和 AUY120 電子天平均購自日本 Shimadzu 公 司;5427R離心機(德國艾本德公司);VX-Ⅲ渦旋混合器 (北京踏錦科技有限公司);BF-2000氮氣吹干儀(北京八 方世紀科技有限公司);博迅HPX-9052MBE恒溫烘箱(上海博訊醫療設備廠)。

    1.2 藥品與試劑

    地西泮對照品(內標,美國 Sigma-Aldrich 公司,批 號:439-14-5,純度:99.7%);甘草酸對照品和硝苯地平 對照品(阿拉丁公司,批號:1405-86-3、21829-25-4,純 度:99.73%、99.76%);甲醇(國藥集團化學試劑有限公 司,批號:67-56-1,色譜級);羧甲基纖維素鈉(CMC-Na, 批號:C8621-25g)和肝素鈉(批號:9041-08-1)均購自北 京索萊寶科技有限公司;乙酸乙酯和環已烷均為分析 純,水為超純水。

    1.3 動物

    SD大鼠,SPF(無特定病原體)級,♀,2月齡,體質量 (210±20)g,由安徽醫科大學實驗動物中心提供,動物 使用許可證號:SYXK(皖)2017-006。所有大鼠飼養在 溫度、濕度、燈光受調控的房間,給予正常飲食,在標準 環境飼養2周后開始實驗。

    2 方法與結果

    2.1 分組與給藥

    將大鼠隨機分成對照組和實驗組,每組10只。實驗 組大鼠灌胃甘草酸 5 mg/kg[5 (] 溶劑為 0.5%CMC-Na 溶 液,給藥劑量按臨床成人常用劑量換算),對照組大鼠灌 胃等量的0.5%CMC-Na溶液,每日1次,連續14 d。第13 天夜里,將大鼠禁食過夜(晚上10:00-第2天白天實驗 前),但是自由飲水,于第14天灌胃30 min后,實驗組和 對照組大鼠同時灌胃硝苯地平 3 mg/kg[6 (] 溶劑為 0.5% CMC-Na溶液,給藥劑量按臨床成人常用劑量換算)。

    2.2 樣品采集

    分別于給予硝苯地平前和給藥后0.25、0.5、0.75、1、 1.5、2、3、4、6、8、12、24 h從眼內眥取血0.5 mL,置于預先 加入肝素鈉的試管中,4 ℃下 3 000 r/min 離心 10 min, -20 ℃冷凍保存備用。

    2.3 溶液的制備

    2.3.1 對照品溶液的制備

    精密稱取硝苯地平對照品 3.0 mg,置于10 mL量瓶中,以甲醇溶解并稀釋至刻度, 混勻,得到質量濃度為 0.3 mg/mL 的硝苯地平貯備液。 準確稱取甘草酸對照品 10.0 mg,置于 10 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并稀釋至刻度,混勻,得到質量濃度為 1.0 mg/mL的甘草酸貯備液。上述溶液均置于冰箱2~8 ℃ 保存備用。

    2.3.2 內標溶液的制備

    精密稱取地西泮對照品 1.00 mg,置于 100 mL 量瓶中,用適量甲醇溶解并稀釋至刻 度,混勻,得到質量濃度為 10.0 μg/mL 的內標貯備液。 精密量取內標貯備液 1.00 mL,置于 100 mL 量瓶中,用 適量甲醇溶解并稀釋至刻度,混勻,得到質量濃度為 100 ng/mL的內標溶液,置于冰箱2~8 ℃保存備用。

    2.4 血漿樣品的處理

    精密量取待測血漿樣品 200 μL,置于 1.5 mL EP 管 中,加入10 μL內標溶液(100 ng/mL),加入乙酸乙酯-環 己烷混合液(3 ∶ 1,V/V) 1 mL 萃取,渦旋 1 min,4 000 r/min 離心 5 min。取上清液 0.8 mL,置于干凈的 EP 管 中,55 ℃水浴加熱,N2吹干,并將殘余物用100 μL流動 相復溶,取20 μL上清液進樣分析。

    2.5 色譜條件

    色譜柱:ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相: 甲醇-水(62∶38,V/V,乙酸調pH為4.5);流速:1.0 mL/min; 柱溫:30 ℃;檢測波長:238 nm;進樣量:20 μL。

    2.6 專屬性試驗

    取空白血漿、加硝苯地平的空白血漿、大鼠灌胃后 12 h 時的給藥血漿各 1 份,按照“2.4”項下方法處理后 (其中空白血漿不加內標溶液),再按照“2.5”項下色譜條 件進樣測定,記錄色譜。結果顯示,硝苯地平和地西泮 的保留時間分別為9.6、5.9 min,血漿里的雜質不影響硝 苯地平的測定,硝苯地平和地西泮可以完全分離,峰形 良好,可見本方法具有專屬性高、分離度好的特點,可以 準確測定硝苯地平的濃度。

    2.7 線性關系與定量下限的考察

    將200 μL空白血漿,置于離心管中,加入10 μL內標 溶液(100 ng/mL),再分別加入50 μL不同質量濃度的硝 苯地平對照品溶液至終濃度分別為20、40、80、160、320 ng/mL。再按照“2.4”項下方法處理后(不再加內標溶 液),按“2.5”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積。以硝 苯地平質量濃度為橫坐標(x),以硝苯地平與內標峰面 積比值的均數為縱坐標(y),采用加權最小二乘法進行 線性回歸分析,得回歸方程為 y=0.011x-0.006 6(r= 0.999 4),硝苯地平的檢測質量濃度在20~320 ng/mL線 性范圍內與峰面積呈良好的線性關系。以信噪比值= 10確定的定量下限為5 ng/mL。

    3 討論

    當今社會,臨床上中西藥結合治療已成常態。中西 藥聯用可以發揮各自優勢,取長補短,提高療效,但也會 不可避免地因兩者發生相互作用從而引起一系列不良 反應,其中代謝酶的改變是最主要因素之一。硝苯地平為肝臟主要代謝酶細胞色素P450(CYP)3A4的底物 ,而 甘草酸會誘導 CYP3A4 的活性,所以甘草酸有可能會 對硝苯地平的藥動學產生影響。



     


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